[发明专利]用于制备具有毒素、佐剂、检测标签和药代动力学半衰期延长剂的蛋白质的岩藻糖连接位点特异性缀合物的方法

权利要求书

1.一种真核细胞，其用于产生包含岩藻糖类似物的分子，其中

(i)在所述细胞中从GDP-D-甘露糖起始的GDP-L-岩藻糖合成途径被阻断，并且

(ii)所述细胞包含GDP-L-岩藻糖类似物。

2.根据权利要求1所述的细胞，其中所述细胞包含至少一种使用GDP-6-脱氧-D-来苏-4-己酮糖作为底物的酶，其中所述酶不催化将GDP-6-脱氧-D-来苏-4-己酮糖转变成GDP-L-岩藻糖的反应。

3.根据权利要求2所述的细胞，其中所述使用GDP-6-脱氧-D-来苏-4-己酮糖作为底物的酶选自：GDP-6-脱氧-D-来苏-4-己酮糖还原酶(RMD)、GDP-过骨胺合成酶(Per)、GDP-6-脱氧-D-塔洛糖合成酶(GTS)、GDP-岩藻糖合成酶Cys109Ser-(GFS-Cys109Ser)突变体、GDP-4-酮-6-脱氧甘露糖-3-脱水酶(ColD)，优选GDP-4-酮-6-脱氧甘露糖-3-脱水酶(ColD)联合GDP-L-可立糖合酶(ColC)，及其变体。

4.权利要求2或3所述的细胞，其中所述酶由瞬时存在或稳定维持于所述细胞中的核酸序列表达。

5.权利要求1至4所述的细胞，其中所述细胞

(i)不包含具有酶活性的GDP-甘露糖脱水酶(GMD)或包含酶活性降低的GDP-甘露糖脱水酶(GMD)，和/或

(ii)不包含具有酶活性的GDP-岩藻糖合成酶(GFS)或包含酶活性降低的GDP-岩藻糖合成酶(GFS)。

6.根据权利要求1至5所述的细胞，其中所述细胞还包含至少一种能够作为岩藻糖基转移酶底物的分子。

7.根据权利要求6所述的细胞，其中所述分子是蛋白质或脂质。

8.根据权利要求7所述的细胞，其中所述蛋白质是内源性或外源性蛋白质。

9.根据权利要求8所述的细胞，其中所述外源性蛋白质由瞬时存在或稳定维持于所述细胞中的核酸序列表达。

10.权利要求7至9所述的细胞，其中所述蛋白质为抗原结合蛋白，优选抗体，更优选IgG1抗体，病毒蛋白或抗原。

11.权利要求1至10所述的细胞，其中所述细胞不包含具有酶活性的α-1，3-岩藻糖基转移酶。

12.权利要求1至11所述的细胞，其中所述细胞是脊椎动物细胞。

13.权利要求12所述的细胞，其中所述脊椎动物细胞是哺乳动物、鱼、两栖类、爬行类的细胞或鸟类细胞。

14.权利要求13所述的细胞，其中

(i)所述哺乳动物细胞是人、仓鼠、狗或猴细胞，优选中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、叙利亚仓鼠成纤维(BHK21)细胞(ATCC CCL-10)、SP2/0-Ag14细胞(ATCC CRL-1581)、NS0细胞(ECACC号85110503)、人宫颈癌(HELA)细胞(ATCC CCL2)、人PER.C6细胞或人AGE1.HN细胞，

(ii)所述鱼细胞是斑点叉尾(Ictalurus punctatus)(河鲶)细胞，优选斑点叉尾(河鲶)卵巢(CCO)细胞(ATCC CRL-2772)，

(iii)所述两栖类细胞是非洲爪蟾(Xenopus laevis)细胞，优选非洲爪蟾肾细胞(ATCC CCL-102)，

(iv)所述爬行类细胞是绿鬣蜥(Iguana iguana)细胞，优选绿鬣蜥心脏(IgH-2)细胞(ATCC CCL-108)；或者

(v)所述鸟类细胞是鸟视网膜细胞，优选AGE1.CR.PIX细胞或鸟体节细胞。

15.权利要求1至14所述的细胞，其中所述GDP-L-岩藻糖类似物包含一个或更多个反应性或活化的取代。

16.权利要求1至15所述的细胞，其中所述GDP-L-岩藻糖类似物是从L-岩藻糖类似物合成的。

17.根据权利要求16的细胞，其中L-岩藻糖类似物是全乙酰化的岩藻糖类似物，优选1，2，3，4-四乙酰基-叠氮基-岩藻糖的吡喃糖形式。