[发明专利]一种检测牛白血病病毒前DNA的试剂盒及其应用有效
| 申请号： | 201210594300.8 | 申请日： | 2012-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN103045762A | 公开（公告）日： | 2013-04-17 |
| 发明（设计）人： | 李凯航;鞠厚斌;刘佩红;周锦萍;王建;陈冈 | 申请（专利权）人： | 上海市动物疫病预防控制中心 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 上海智信专利代理有限公司 31002 | 代理人： | 邓琪 |
| 地址： | 201103 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 白血病病毒 dna 试剂盒 及其 应用 | ||
1.一种检测牛白血病病毒前DNA的试剂盒，所述试剂盒含有：a）荧光PCR反应液，b）荧光探针，c）热启动Taq酶，d）标准阳性模板，e）阴性对照，其特征在于，所述荧光PCR反应液中含有上、下游引物，其中上游引物的序列如SEQ ID NO：2所示，下游引物的序列如SEQ ID NO：3所示，所述荧光探针的序列如SEQ ID NO：4所示，所述荧光探针的序列5’端设计有荧光物质，3’端设计有淬灭物质，所述标准阳性模板的核苷酸插入序列如SEQID NO：5所示。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，检测时所述上、下游引物单条的终浓度为0.05-1μM。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光PCR反应液中还含有Mg2+，检测时所述Mg2+的终浓度为1.5-5.0mM。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光PCR反应液中还含有四种dNTPs，检测时所述各种dNTPs的终浓度为0.1-1mM。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，检测时所述荧光探针的终浓度为0.05-1μM。
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，检测时所述热启动Taq酶的终浓度为0.01-5U/uL。
7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光探针的序列5’端的荧光物质为FAM、HEX或VIC中的一种，3’端的淬灭物质为TAMRA。
8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述标准阳性模板是由所述上、下游引物对牛白血病病毒前DNA进行PCR扩增获得的核苷酸片段插入pBS-T载体构建而成的重组质粒。
9.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有：由各为0.3mM的dNTPs，2.4mM Mg2+，各为0.288μM的上、下游引物组成的所述荧光PCR反应液，2.5mL/管×2；6μM荧光探针，200μL/管；7.5U/μL热启动Taq酶，200μL/管；标准阳性模板，250μL/管；阴性对照，250μL/管。
10.根据权利要求1所述的检测牛白血病病毒前DNA的试剂盒在检测全血中牛白血病病毒前DNA中的应用。
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