[发明专利]一种WHV-S蛋白基因及基于该基因的零背景DNA克隆载体的构建方法

权利要求书

1.一种WHV-S蛋白基因，其特征在于：所述WHV-S蛋白基因的核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO:1的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的一种WHV-S蛋白基因，其特征在于：所述WHV-S蛋白基因编码的WHV-S蛋白具有序列表中SEQ ID NO:2的氨基酸序列。

3.根据权利要求2所述的一种WHV-S蛋白基因，其特征在于：所述WHV-S蛋白基因编码全部或部分WHV-S蛋白序列、WHV-S蛋白的同源蛋白序列或者所述WHV-S蛋白序列和WHV-S蛋白的同源蛋白序列的缺失、突变或杂交序列。

4.根据权利要求3所述的一种WHV-S蛋白基因，其特征在于：所述WHV-S蛋白的同源蛋白序列或者所述WHV-S蛋白序列和WHV-S蛋白的同源蛋白序列的缺失、突变或杂交序列具有序列表中SEQ ID NO:3~ SEQ ID NO:6的氨基酸序列。

5.根据权利要求1所述的一种WHV-S蛋白基因，其特征在于：还包括一具有序列表中SEQ ID NO:7的核苷酸序列的关键DNA序列，所述关键DNA序列编码的关键融合蛋白具有序列表中SEQ ID NO:8的氨基酸序列。

6.一种基于权利要求1所述的WHV-S蛋白基因的零背景DNA克隆载体，其特征在于：所述零背景DNA克隆载体包含或部分包含所述WHV-S蛋白基因DNA分子。

7.一种基于权利要求1所述的WHV-S蛋白基因的零背景DNA克隆载体的构建方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤1）将所述的WHV-S蛋白基因与目标克隆载体质粒进行扩增、酶切和拼接；

步骤2）将步骤1）所得产物转化大肠杆菌感受态细胞；

步骤3）挑取步骤2）所得的大肠杆菌进行克隆，克隆鉴定后，扩增重组正确的质粒DNA；

步骤4）提取质粒DNA，进行DNA测序分析，得到的阳性重组质粒即为零背景DNA克隆载体质粒。

8.根据权利要求7所述的零背景DNA克隆载体的构建方法，其特征在于：所述步骤1）具体包括以下步骤：

步骤a）将野生型或人工合成的WHV-S蛋白基因进行PCR扩增，所述扩增的蛋白编码DNA至少包含WHV-S蛋白基因C末端50个氨基酸残基所对应的DNA序列，所述PCR产物DNA的3’-端添加终止密码，两端添加与DNA克隆载体适配的内切酶位点；

步骤b）将目标克隆载体进行PCR扩增，打开LacZα基因3’-末端，去除LacZα基因的固有终止密码，两端分别用内切酶处理；

步骤c）将步骤a）所得产物连接到步骤b）所得产物的LacZα基因的下游，构成一环状质粒载体。

9.根据权利要求7所述的零背景DNA克隆载体的构建方法，其特征在于：所述目标克隆载体是pUC系列的质粒载体。

10.根据权利要求9所述的零背景DNA克隆载体的构建方法，其特征在于：所述目标克隆载体为pUC18或pUC19。