[发明专利]3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸甲酯的生物制备方法

权利要求书

1. 一种3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸甲酯的生物制备方法，其特征在于：其以3-羰基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸甲酯为底物，该底物在生物催化剂、辅因子、氨基供体和助溶剂的存在下发生反应生成目标产物3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸甲酯，所述的生物催化剂为重组转氨酶，所述的重组转氨酶的制备方法为：将含有转氨酶的单菌落接种到含卡那霉素抗性的液体LB培养基中，于35-40℃下活化8-12小时，将活化后得到的培养物转接到含卡那霉素抗性的液体LB培养基中，于35-40℃下扩大培养至OD600值达到0.6-0.8，加入诱导剂，于25-35℃继续培养8-12小时，离心，收集沉淀物，加入磷酸盐缓冲液得到悬浮液，将悬浮液置于冰浴中超声波破碎8-12分钟，再离心，将上清液预冻至温度为-10~-25℃，然后再冻干24-48小时，即得重组转氨酶，所述的反应在pH为6.0-9.0的水相缓冲液中进行。

2. 根据权利要求1所述的3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸甲酯的生物制备方法，其特征在于：在起始时的反应体系中，所述的重组转氨酶：所述的辅因子：所述的氨基供体：所述的3-羰基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸甲酯的质量比为0.4-0.6：0.01-0.1：5-7：1。

3. 根据权利要求1所述的3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸甲酯的生物制备方法，其特征在于：所述的诱导剂为异丙基-β-D-硫代半乳糖苷或乳糖。

4. 根据权利要求1所述的3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸甲酯的生物制备方法，其特征在于：所述的辅因子为磷酸吡哆醛。

5. 根据权利要求1所述的3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸甲酯的生物制备方法，其特征在于：所述的氨基供体为异丙胺。

6. 根据权利要求1所述的3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸甲酯的生物制备方法，其特征在于：所述的助溶剂为二甲基亚砜。

7. 根据权利要求1所述的3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸甲酯的生物制备方法，其特征在于：所述的水相缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲溶液或三乙醇胺盐酸缓冲溶液。

8. 根据权利要求1所述的3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸甲酯的生物制备方法，其特征在于：所述的反应在pH为6.0-9.0的水相缓冲液中进行。

9. 根据权利要求1或2所述的3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸甲酯的生物制备方法，其特征在于：所述的制备方法的实施过程如下：在反应容器中依次加入所述的水相缓冲液、底物3-羰基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸甲酯、所述的氨基供体、所述的助溶剂、所述的辅因子和所述的重组转氨酶，搅拌均匀，在25~45℃和氮气吹扫的条件下反应，利用HPLC检测反应进程，待转化率达90~99%时，调节pH至2-3，硅藻土过滤，在滤液中加入乙酸乙酯进行多次萃取，旋转蒸发蒸发脱去溶剂，即得3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酸甲酯产品。