[发明专利]一种邻苯二甲酸二丁酯的化学发光检测试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测邻苯二甲酸二丁酯（DBP）的化学发光酶免疫检测试剂盒，用于检测白酒中的DBP含量或残留量。属于免疫学检测领域。

背景技术

邻苯二甲酸二丁酯（DBP）属于邻苯二甲酸酯类，是目前国内外工业生产中使用最多的塑化剂（又称增塑剂），广泛存在于食品包装、化妆品、医疗器材以及环境水体中。这类塑化剂并非食品或食品添加物，但会通过环境迁移、食品包装迁移及非法添加等进入食品，对人体健康产生毒害作用，如造成内分泌失调，影响正常生育能力，在体内长期蓄积会导致畸形、癌变和突变，对心血管、消化和泌尿系统也有很大伤害。因此，我国卫生部卫办监督函〔2011〕551号文件中规定：严禁在食品、食品添加剂中人为添加邻苯二甲酸酯类物质，食品、食品添加剂中的邻苯二甲酸二（α-乙基已酯）（DEHP）、邻苯二甲酸二异壬酯（DINP）和邻苯二甲酸二正丁酯（DBP）最大残留量分别为1.5mg/kg、9.0mg/kg和0.3mg/kg。

目前文献报道有关邻苯二甲酸酯类物质的检测方法有气相色谱法、超高效液相色谱法、高效液相色谱-质谱法、气相色谱-离子阱质谱法等。但研究大多集中于环境样品和塑料包装材料，对于食品中的污染情况检测研究较少。我国食品中邻苯二甲酸酯检测使用“GB/T 21911-2008《食品中邻苯二甲酸酯的测定》”，包装中邻苯二甲酸酯检测使用“GB/T 21928-2008《食品塑料包装材料中邻苯二甲酸酯的测定》”，两种检测方法均运用气相色谱-质谱联用（GC-MS）的方法进行测定。该方法灵敏、准确，特异性强、分离度好，可以同时测定多种药物，但需要昂贵的仪器、样品的前处理复杂、繁琐费时、检测的成本较高，不能现场操作，而且需专业人员操作，所以限制了其应用。与之相比，化学发光酶免疫测定法具有特异性好、灵敏度高、操作简便、检测成本低、适合于批量样品的筛选检测等优点，而且所需设备少，操作简单易学，成本低廉，能够更好地满足我国食品企业、政府职能监管部门等开展检测工作。

发明内容

本发明的目的是提供一种DBP的化学发光酶免疫检测试剂盒。该试剂盒具有检测灵敏度高、应用灵活、方便的特点，可用于白酒中DBP的残留量检测。

为实现上述目的，本发明主要是利用抗原与抗体的特异性免疫反应的基本原理来实现的。化学发光免疫分析法是化学发光法和免疫分析法结合的产物，因此同时具有化学发光法的高灵敏性和免疫分析法的高特异性。在整个反应过程中，样品中DBP含量越高，反应体系中发光强度越弱；反之，样品中DBP含量越少，发光强度越高。

本发明的检测DBP的化学发光酶免疫检测试剂盒含有盒体，设在盒体内的反应杯和设在盒体内的试剂。 具体含有以下成分：

反应杯为白色不透明的塑料反应微孔，固定于黑色外框支撑架上，放于自封袋内。

应用pH=7.4 0.05 mol/L的PBS溶液稀释DBP纯品得到的DBP系列标准品溶液，浓度范围至少包含了0.02~1.62mg/L的浓度区间。

酶标抗原工作液。是由DBP与OVA偶合制成的偶联物与辣根过氧化物酶反应获得。

磁标抗体工作液。由DBP与BSA偶合制成的偶联物作为免疫原免疫Balb/c小鼠制备获得抗体后与免疫磁珠反应获得。

化学发光发光底物液。发光底物液分为A、B液。A液为化学发光底物-鲁米诺和发光增强剂-对甲苯酚溶液，B液为过氧化氢脲溶液。

浓缩样品稀释液。浓缩复溶液具体为2倍浓缩磷酸盐缓冲液，使用前用双蒸水稀释至工作浓度后使用，用于样品前处理。

浓缩洗涤液。浓缩洗涤溶液具体为含有吐温-20（Tween-20）缓冲液的20倍浓缩磷酸盐缓冲液，使用前用双蒸水稀释至工作浓度后使用，用于实验过程中洗涤化学发光板。

本发明溶液的配制：

本发明试剂盒中涉及的DBP标准品溶液、抗体工作液、化学发光溶液及洗涤溶液及其配方对本发明试剂盒检测的灵敏度影响很大；其中各溶液的主要成分及其配制方法是：

1、DBP标准溶液：以常规方法将DBP纯品用0.05 mol/L，pH=7.4的PBS配制成浓度分别为0、0.02、0.06、0.18、0.54、1.62 mg/L的DBP标准溶液。

2、酶标抗原工作液：用DBP与OVA偶联制备的偶联物与辣根过氧化物酶偶联制备得到。用pH7.6的磷酸钠为0.01M、NaCl为0.25M的缓冲溶液稀释至工作浓度。