[发明专利]一种放线菌710发酵条件的选择方法

说明书

技术领域

本发明属于放线菌生物防治技术领域，尤其是涉及一种放线菌710发酵条件的选择方法。

背景技术

放线菌菌株710是一种稀有菌株，能够对番茄早疫有较好的抑制作用。因此Streptomyces sp．710可以作为有潜在开发价值的抗生素产生菌。为了进一步开发利用该菌，有必要对其发酵培养基进行了选择，提高抗生素的产量，将会对开发新型农药提供依据。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种操作方法简单、实验结果准确的放线菌710发酵条件的选择方法。

本发明的技术方案是一种放线菌710发酵条件的选择方法，包括如下步骤：

(1)、用接种环将放线菌710菌株的孢子接种于高氏I号培养基斜面上，“Z”字法，在28℃下培养7d，得到待发酵的菌株；

(2)、用无菌接种环挑取3～5环接种于装有100mL液体发酵培养基的250mL三角瓶中，25℃，250r/min条件下振荡培养4d，取出将其用滤纸滤出上清液，得到发酵液，其中液体发酵培养基中含有葡萄糖10g、蛋白胨30g、NaCl 2.5g、CaCO₃2.0g、H₂O 1000ml、小米浸种10.4g；

(3)、以番茄早疫为供试菌，将发酵液与PDA培养基混合以1：9、2：8、3：7制成平板接入番茄早疫的菌饼(选出最佳发酵液与PDA培养基混合的比例)，以无菌水处理作为对照，培养2天，采用十字交叉法测定抑菌圈直径，每个处理重复3次；

(4)、采用单因子实验，测定碳源、氮源、NaCl进行选择，在单因子测试的基础上用正交试验进行选择。

优选的，步骤(4)中碳源的选择方法，采用如下步骤进行：在液体发酵培养基的基础上，其他成分不变而改变碳源的种类，选取三种浓度10.0g/L、15.0g/L、20.0g/L的葡萄糖，每个处理重复3次，进行摇床发酵，测定发酵液抑菌活性，选择最佳浓度，在其基础上分别加入蔗糖、乳糖、小米浸种作碳源进行单因子试验，蔗糖、乳糖、小米分别取三种浓度10.0g/L、15.0g/L、20.0g/L，每个处理重复3次，进行摇床发酵，测定发酵液抑菌活性。

优选的，步骤(4)中氮源的选择方法，采用如下步骤进行：固定初始液体发酵培养基的碳源为10.0g/L的葡萄糖和15.0g/L的小米，其他成分不变，改变氮源种类，分别加入蛋白胨、酵母膏以及(NH4)2SO4作为氮源作为单因子试验，并蛋白胨、酵母膏以及(NH4)2SO4分别设计3.0g/L、6.0g/L、9.0g/L三个浓度水平，每个处理重复3次，进行药瓶发酵，测定发酵液抑菌活性。

优选的，步骤(4)中NaCl的选择方法，固定碳源为3.0g/L酵母膏，其他成分不变，分别加入0.0、2.5、5.0、7.5、10.0g/L的NaCl，每个处理重复3次，进行摇瓶发酵，测定发酵液抑菌活性。

优选的，步骤(4)中正交试验，在以上单因子实验结果的基础上，选取葡萄糖、酵母膏、NaCl三个因素，分别取3个水平进行正交试验，按照L9(33)安排实验。

一种根据如上所述的放线菌710发酵条件的选择方法确定的放线菌710菌株的培养基，其特征在于：包括葡萄糖10.0g，酵母膏3.0g，NaCl 5.0g，小米15g，CaCO₃2.0g，水1000mL。

本发明的优点及效果：本发明选择合适的培养基以及合理的供试菌，试验步骤实际合理，通过本发明的操作方法，可以得到有效的放线菌710发酵条件，提高代谢产物抑菌活性，可以提高抗生素的产量，将会对开发新型农药提供依据。

具体实施方式

为了理解本发明，下面通过具体的实施例对本发明作进一步说明。

一种放线菌710发酵条件的选择方法，包括如下步骤：

(1)、用接种环将放线菌710菌株的孢子接种于高氏I号培养基斜面上，“Z”字法，在28℃下培养7d，得到待发酵的菌株；

(2)、用无菌接种环挑取3～5环接种于装有100mL液体发酵培养基的250mL三角瓶中，25℃，250r/min条件下振荡培养4d，取出将其用滤纸滤出上清液，得到发酵液，其中液体发酵培养基中含有葡萄糖10g、蛋白胨30g、NaCl 2.5g、CaCO₃2.0g、H₂O 1000ml、小米浸种10.4g；