[发明专利]一种放线菌710发酵条件的选择方法

权利要求书

1.一种放线菌710发酵条件的选择方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)、用接种环将放线菌710菌株的孢子接种于高氏I号培养基斜面上，“Z”字法，在28℃下培养7d，得到待发酵的菌株；

(2)、用无菌接种环挑取3～5环接种于装有100mL液体发酵培养基的250mL三角瓶中，25℃，250r/min条件下振荡培养4d，取出将其用滤纸滤出上清液，得到发酵液，其中液体发酵培养基中含有葡萄糖10g、蛋白胨30g、NaCl 2.5g、CaCO₃2.0g、H₂O 1000ml、小米浸种10.4g；

(3)、以番茄早疫为供试菌，将发酵液与PDA培养基混合以1：9、2：8、3：7制成平板接入番茄早疫的菌饼，以无菌水处理作为对照，培养2天，采用十字交叉法测定抑菌圈直径，每个处理重复3次；

(4)、采用单因子实验，测定碳源、氮源、NaCl进行选择，在单因子测试的基础上用正交试验进行选择。

2.如权利要求1所述的放线菌710发酵条件的选择方法，其特征在于，步骤(4)中碳源的选择方法，采用如下步骤进行：在液体发酵培养基的基础上，其他成分不变而改变碳源的种类，选取三种浓度10.0g/L、15.0g/L、20.0g/L的葡萄糖，每个处理重复3次，进行摇床发酵，测定发酵液抑菌活性，选择最佳浓度，在其基础上分别加入蔗糖、乳糖、小米浸种作碳源进行单因子试验，蔗糖、乳糖、小米分别取三种浓度10.0g/L、15.0g/L、20.0g/L，每个处理重复3次，进行摇床发酵，测定发酵液抑菌活性。

3.如权利要求1所述的放线菌710发酵条件的选择方法，其特征在于，步骤(4)中氮源的选择方法，采用如下步骤进行：固定初始液体发酵培养基的碳源为10.0g/L的葡萄糖和15.0g/L的小米，其他成分不变，改变氮源种类，分别加入蛋白胨、酵母膏以及(NH4)2SO4作为氮源作为单因子试验，并蛋白胨、酵母膏以及(NH4)2SO4分别设计3.0g/L、6.0g/L、9.0g/L三个浓度水平，每个处理重复3次，进行药瓶发酵，测定发酵液抑菌活性。

4.如权利要求1所述的放线菌710发酵条件的选择方法，其特征在于，步骤(4)中NaCl的选择方法，固定碳源为3.0g/L酵母膏，其他成分不变，分别加入0.0、2.5、5.0、7.5、10.0g/L的NaCl，每个处理重复3次，进行摇瓶发酵，测定发酵液抑菌活性。

5.如权利要求1所述的放线菌710发酵条件的选择方法，其特征在于，步骤(4)中正交试验，在以上单因子实验结果的基础上，选取葡萄糖、酵母膏、NaCl三个因素，分别取3个水平进行正交试验，按照L9(33)安排实验。

6.一种根据权利要求1～5中任一项所述的放线菌710发酵条件的选择方法确定的放线菌710菌株的培养基，其特征在于：包括葡萄糖10.0g，酵母膏3.0g，NaCl 5.0g，小米15g，CaCO₃2.0g，水1000mL。