[发明专利]4,6-O-亚乙基-α-D-吡喃葡萄糖衍生物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及4,6-O-亚乙基-α-D-吡喃葡萄糖类化合物，具体涉及一种4,6-O-亚乙基-α-D-吡喃葡萄糖衍生物及其制备方法，以及该衍生物在4,6-O-亚乙基-α-D-吡喃葡萄糖分析检测方面的应用。

背景技术

依托泊苷为细胞周期特异性抗肿瘤药物，作用于DNA拓扑异构酶Ⅱ，形成药物-酶-DNA稳定的可逆性复合物，阻碍DNA修复。实验发现这复合物可随药物的清除而逆转，使损伤的DNA得到修复，降低了细胞毒作用。因此，延长药物的给药时间，可能提高抗肿瘤活性。

由D-葡萄糖生成4,6-O-亚乙基-α-D-吡喃葡萄糖(以下简称：亚乙基糖)的反应是依托泊苷生产过程中的一步重要反应。但由于D-葡萄糖与亚乙基糖均无紫外吸收，故多用旋光法测定亚乙基糖的纯度，而该方法无法准确得知亚乙基糖的含量及对反应终点进行准确判断。因此，建立一种更加方便、快捷、可靠的葡萄糖及亚乙基糖检测方法十分必要。

大连轻工业学院等八大院校编著的《食品分析》中《第九章糖类物质的测定》，阐述了常用的糖类检测方法，其中化学分析法是应用最广泛的常规分析方法，如直接滴定法、高锰酸钾法、碘量法等，但所测得的多是糖类物质的总量，不能确定混合糖的组分及其每种糖的含量。利用纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法可以对混合糖中各种糖分进行分离和定量，但纸色谱法和薄层色谱法的分离效果差且操作时间长。而且糖类不易挥发，气相色谱也不是好的选择。高效液相色谱法虽然可以做到有效分离，但需要配备特殊的色谱柱进行分离，并且由于糖类化合物的紫外吸收弱，需要采用示差或蒸散检测器检测，从而大大增加了设备投资和维护的成本。

总体而言，在现有技术中，糖类分析方法虽多，但均有其不足之处。尤其是关于亚乙基糖的分析检测方法更是未有报道。

发明内容

本发明提供了一种4,6-O-亚乙基-α-D-吡喃葡萄糖衍生物及其制备方法和应用，用以解决上述亚乙基糖在分析检测方面存在的缺陷和不足。

为实现上述目的，本发明所述的4,6-O-亚乙基-α-D-吡喃葡萄糖衍生物即式（I）结构化合物：

本发明所述的式（I）化合物以4,6-O-亚乙基-α-D-吡喃葡萄糖（式II结构化合物）为原料通过成脎反应获得。

进一步，所述成脎反应的原料包括水、醋酸、苯肼和式II化合物，合成路线如下所示：

所述原料中醋酸、苯肼和式II化合物的摩尔量比为5~5.5∶2.5~3∶1。

所述成脎反应的反应温度为80~95℃，反应时间为30~50分钟；温度低、时间短则反应不充分，温度高需油浴加热不方便，反应过长会影响反应纯度。

本发明还提供了一种4,6-O-亚乙基-α-D-吡喃葡萄糖的分析方法，其包括将待测样品中4,6-O-亚乙基-α-D-吡喃葡萄糖衍生为具有紫外吸收的式（I）化合物，然后通过高效液相色谱进行分析检测。

所述高效液相色谱的检测所用色谱条件包括：

色谱柱选自氰基液相色谱柱，

紫外吸收检测波长选自255nm，

流动相包括醋酸盐水溶液和乙腈。

所述流动相中醋酸盐水溶液与乙腈的体积比为40~70∶60~30，体积比优选55∶45，所述醋酸盐水溶液的浓度为0.030~0.040mol/L，浓度优选0.033mol/L。

所述流动相的pH值为3.5-6.0，优选4.0，用于调整峰型。

所述流动相的pH值通过醋酸调节。

所述色谱条件还包括流动相流速为0.5~1.5ml/min，优选1.0ml/min，色谱柱柱温为25~40℃，优选30℃。

所述分析方法用于对包含D-葡萄糖和4,6-O-亚乙基-α-D-吡喃葡萄糖的混合物的定量或定性分析。

本发明提供的亚乙基糖衍生物结构稳定，便于分析检测，亚乙基糖可以通过本发明提供的制备方法简单，快捷，收率稳定和选择性强的转换为所述亚乙基糖衍生物，因此可以准确反映出亚乙基糖的含量。本发明提供的检测方法可以将亚乙基糖衍生物和D-葡萄糖脎完全分离，且主峰明显，分析时间短，选择性、分辨率、灵敏度高，重现性好，准确可靠。因此特别适用于D-葡萄糖和4,6-O-亚乙基-α-D-吡喃葡萄糖混合物的分析。

附图说明

图1为实施例3所述D-葡萄糖脎的HPLC谱图。

图2为实施例4所述式（I）化合物的HPLC谱图。

图3为实施例5所述D-葡萄糖脎的甲醇溶液浓度和峰面积的线性图。