[发明专利]环介导等温扩增技术检测贝氏柯克斯体的非诊断性方法

权利要求书

1.环介导等温扩增技术检测贝氏柯克斯体的非诊断性方法，其特征在于，该非诊断性方法包括：

以贝氏柯克斯体com1基因序列作为靶序列，比对后选取保守区域，设计外引物F3、B3和内引物FIP、BIP为下面序列或其全部对应的互补序列：

2.如权利要求1所述的非诊断性方法，其特征在于，所述外引物：内引物＝比例范围为1：4~1：12。

3.如权利要求2所述的非诊断性方法，其特征在于，所述外引物：内引物＝1：8。

4.如权利要求1所述的非诊断性方法，其特征在于，所述环介导等温扩增温度为58℃~65℃。

5.如权利要求4所述的非诊断性方法，其特征在于，所述环介导等温扩增温度为63℃。

6.如权利要求1所述的非诊断性方法，其特征在于，所述环介导等温扩增时间为15分钟~60分钟。

7.如权利要求6所述的非诊断性方法，其特征在于，所述环介导等温扩增时间为60分钟。

8.如权利要求1所述的非诊断性方法，其特征在于，所述非诊断性方法包括步骤：

①提取样品基因组DNA:取培养后菌液于EP管，离心，收集后，弃上清,用dH₂O重悬洗涤细菌，离心，弃上清，重复一次，最后用dH₂O重悬沸水浴处理裂解细菌，离心，使细菌蛋白质等杂质沉淀于底部，取上清于EP管，上清即成DNA溶液，-20℃冰箱放置备用或使用基因组DNA提取试剂盒进行DNA的提取；

②利用所述外引物F3、B3和内引物FIP、BIP、提取的基因组DNA、酶、缓冲液配制25μL反应体系；

③环介导等温扩增。

9.如权利要求8所述的非诊断性方法，其特征在于，所述25μL反应体系组分如下：

10.如权利要求8所述的非诊断性方法，其特征在于，所述等温扩增采用恒温水浴、PCR、Real-time PCR、LC320浊度仪、GenieII，使用仪器GenieII进行扩增时，试剂中加入SYBR Green I染料再进行扩增；使用所述荧光定量PCR仪进行扩增时，试剂中加入SYBR Green I染料，进行扩增时选用SYBR通道进行荧光信号收集；试剂中加入钙黄绿素进行扩增时选用FAM通道进行荧光信号收集。