[发明专利]一种斯氏木碱的制备方法

说明书

技术领域

    本发明属于天然产物分离领域，具体是涉及一种应用高速逆流色谱技术从威廉斯氏木中纯化斯氏木碱的方法。

背景技术

斯氏木碱（Sickingine）是从茜草科植物染料斯氏木Sickingia tinctoria (HBK)Schum.及威廉斯氏木Sickingia williamsii Standl.植物中分离得到的一种吲哚类生物碱，呈淡黄色无定形粉末转，mp.136-138℃。现代药理研究表明，斯氏木碱具有抑制回肠收缩作用，可抑制豚鼠离体回肠由点刺激引起的收缩，ED₅₀为100μM。

现有提取斯氏木碱的报道并不多见，市场上也尚未有斯氏木碱对照品的出售，因此提供一种斯氏木碱的制备方法则很有必要，可以为其后续研究提供支持。

发明内容

本发明的目的是提供一种斯氏木碱的制备方法，该方法制得的斯氏木碱质量好，纯度高。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种斯氏木碱的制备方法，其特征在于包含以下步骤：

（1）提取：将威廉斯氏木药材粉碎，加入5~12倍量的乙醇水溶液液回流或渗漉提取1~2次，每次0.5~5h，合并得提取液；

（2）除杂：将上述提取液浓缩至小体积，加入2~5倍量质量百分比浓度为1%的盐酸水溶液溶解，过滤，再加入碱液将稀释液调至pH9~11，加等体积量的二氯甲烷萃取，萃取液回收试剂得威廉斯氏木总生物碱；

（3）纯化：将上述威廉斯氏木总生物碱采用高速逆流色谱法分离纯化，设定色谱仪转速为800~900r/min，流速为1.5~5.0ml/min，收集流出液，回收试剂，真空干燥得产品。

步骤（1）所述乙醇液为体积百分比浓度为60~80%的乙醇水溶液。

步骤（2）所述提取液浓缩至密度1.2~1.6g/ml。

步骤（2）所述碱性溶液为2~5mol/L的氨水溶液。

步骤（3）所述高速逆流色谱法采用的溶剂系统是二氯甲烷-甲醇-pH3.3磷酸盐缓冲液（5-9:15-17:5-8）。

步骤（3）所述溶剂系统制备方法为：将氯仿-甲醇-pH3.3磷酸盐缓冲液按上述比例量取，混合均匀后静置，放出上层作为固定相，下层作为流动相，将威廉斯氏木总生物碱用下相溶解。

本发明的有益效果是采用高速逆流色谱法纯化，样品损失少，得率高。

具体实施方式：

    下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

实施例1：

取威廉斯氏木全植物10kg，粉碎，加入50L60%乙醇回流提取2次，每次0.5h，合并提取液，浓缩至密度1.5g/ml，加入2倍量1%盐酸溶液稀释，滤除沉淀后，加入2mol/L氨水调至pH9.2，用等量二氯甲烷萃取，萃取液回收试剂，得威廉斯氏木总碱。

取氯仿-甲醇-pH3.3磷酸盐缓冲液按（5:13:6）体积比置于分液漏斗中，混匀后，静置，放出上层作为固定相，下层作为流动相，将威廉斯氏木总碱用下相溶解，开启制备型高速逆流色谱仪，先将固定相泵入色谱柱中，再以1.5ml/min流速泵入流动相，并通过进样阀连续进样，控制转速为800r/min，收集流出液，浓缩，干燥得斯氏木碱1.45g，检测含量94.4%。

实施例2：

取威廉斯氏木全植物20kg，粉碎，加入240L70%乙醇渗漉提取2次，每次5h，合并提取液，浓缩至密度1.6g/ml，加入3倍量1%盐酸溶液稀释，滤除沉淀后，加入4mol/L氨水调至pH11.0，用等量二氯甲烷萃取，萃取液回收试剂，得威廉斯氏木总碱。

取氯仿-甲醇-pH3.3磷酸盐缓冲液按（6:17:5）体积比置于分液漏斗中，混匀后，静置，放出上层作为固定相，下层作为流动相，将威廉斯氏木总碱用下相溶解，开启制备型高速逆流色谱仪，先将固定相泵入色谱柱中，再以3.5ml/min流速泵入流动相，并通过进样阀连续进样，控制转速为920r/min，收集流出液，浓缩，干燥得斯氏木碱2.81g，检测含量96.2%。

实施例3：

取威廉斯氏木全植物20kg，粉碎，加入160L80%乙醇回流提取1次，提取3h，合并提取液，浓缩至密度1.2g/ml，加入5倍量1%盐酸溶液稀释，滤除沉淀后，加入5mol/L氨水调至pH10.3，用等量二氯甲烷萃取，萃取液回收试剂，得威廉斯氏木总碱。