[发明专利]一种克鲁维毕赤酵母克鲁维变种菌株及其培养方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种克鲁维毕赤酵母克鲁维变种菌株及其培养方法与应用，特别涉及一种产香的克鲁维毕赤氏酵母克鲁维变种(Pichia kluyveri var.kluyveri)菌株SS1-5及其培养方法与应用，属于微生物技术领域。 

背景技术

我国是啤酒饮料生产和消费大国，啤酒饮料消费人数众多，但酒中乙醇及微量甲醇、甲醛对消费者健康的危害引起社会的普遍关注，特别是过量嗜酒习惯对消费者危害极大，易因酒驾导致交通肇事,醉酒引发家庭矛盾等。为此,开发无醇或低醇饮品，提高营养水平，既满足消费者需求，也有利于人体健康，又可扩大消费人群，符合我国食品发展方向和世界饮料发展潮流。为此低醇或无醇啤酒饮料应运而生，具有广阔的发展市场。低醇饮料需要在保持普通啤酒风味品质的同时，还要求乙醇含量应低于0.5%vol。目前无醇啤酒饮料生产方法主要有:脱醇法、控制发酵法和路德类酵母发酵法,但随之带来工艺流程和生产成本的增加，使得其推广受到限制。 

如中国专利文献CN86104029A（申请号86104029）公开了生产低醇饮料的方法，是使高醇饮料，加入的水和再循环的滞留液之混合物通过反渗透系统，形成渗透物和滞留物。从系统中排除主要含有醇和水的渗透物，小部分滞留物经回收后作为产品，同时将大部分滞留物再循环到反渗透系统，与新加入的饮料和水混合，这一技术工序复杂，能耗高。因此，通过筛选新的菌株，优化生产工艺来生产低醇饮料是解决上述问题的经济而有效途径。 

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种克鲁维毕赤酵母克鲁维变种菌株及其培养方法与应用。 

术语说明 

低醇饮料：乙醇含量低于0.5％（w/w）的啤酒饮料。 

本发明的技术方案如下： 

一种克鲁维毕赤酵母克鲁维变种(Pichia kluyveri var.kluyveri)菌株SS1-5，2010年12月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中科院微生物研究所，保藏号CGMCC NO：4494。 

上述克鲁维毕赤酵母克鲁维变种(Pichia kluyveri var.kluyveri)菌株SS1-5分离自新压榨的鲜葡萄汁中，菌落边缘及中心都呈奶油色，球状突起，表面皱褶粗糙，不透明，不反光，边缘不整齐，毛绒状，白色暗淡；细胞呈椭圆形。液体YPD培养基培养2-3d，有沉淀和绒状膜出现。该菌株耐45℃，耐pH2.5-12.0，耐SO₂ 400mg/L，耐酒精8%(vol)，耐NaCl为100.0g/L，耐葡萄糖500.0g/L。 

上述克鲁维毕赤酵母克鲁维变种(Pichia kluyveri var.kluyveri)菌株SS1-5的培养方法，步骤如下： 

（1）取克鲁维毕赤酵母克鲁维变种菌株SS1-5，接种于YEPD固体培养基，在25～28 ℃条件下，活化培养40～48h，制得活化菌株； 

（2）将步骤（1）制得的活化菌株接种于YEPD液体培养基中，在25～28℃条件下，培养15～20h，制得种子液； 

（3）将步骤（2）制得的种子液按照体积比2%～5%接种于麦芽汁液体培养基中，在25～28℃条件下，培养32～40h，即得生产用种子液。 

根据本发明优选的，所述步骤（1）中的YEPD固体培养基每升组分如下：葡萄糖20克，酵母粉10克，蛋白胨10克，琼脂20克，用蒸馏水定容至1000毫升，pH值自然，115℃灭菌30min。 

根据本发明优选的，所述步骤（2）中的YEPD液体培养基每升组分如下：葡萄糖20克，酵母粉10克，蛋白胨10克，用蒸馏水定容至1000毫升，pH值自然，115℃灭菌30min。 

根据本发明优选的，所述步骤（3）中的麦芽汁液体培养基组分如下：麦芽汁浓度11～13°P，115℃灭菌30min，pH值自然。 

上述克鲁维毕赤酵母克鲁维变种(Pichia kluyveri var.kluyveri)菌株SS1-5在制备低醇饮料中的应用。 

上述应用，步骤如下： 

（i）将原料大麦芽经糖化后，按照2～4g/kg的添加量添加酒花，静置20～40min，分离酒花糟及热凝固物，冷却，制得糖度为11～13°P的麦芽汁；