[发明专利]制备生物柴油催化剂的脂肪酶酯化活力的测定方法

权利要求书

1.一种制备生物柴油催化剂的脂肪酶酯化活力的测定方法，其特征是用脂肪酶在微水相体系条件下催化月桂酸和月桂醇在恒温摇床中发生酯化反应，温度设定为30℃-70℃，反应30min后，吸取2ml的反应液放在另外的三角瓶中，加入10ml的乙醇-丙酮终止液和100ul的酚酞显色液后，用0.05M的NaOH标准液来滴定，直至pH等于10.3为滴定终点，记录NaOH的消耗量，1g固体酶粉或1ml液体酶，1min内消耗的月桂酸的量，根据消耗的NaOH的量来测定脂肪酶酯化活力。

2.根据权利要求1所述的制备生物柴油催化剂的脂肪酶酯化活力的测定方法，

其特征在于所述的微水相条件是水加入量与底物的体积比为1:1000—3:1000。

3.根据权利要求1所述的制备生物柴油催化剂的脂肪酶酯化活力的测定方法，其特征在于所述的恒温摇床转速设定为180rpm—220rpm。

4. 根据权利要求1所述的制备生物柴油催化剂的脂肪酶酯化活力的测定方法，其特征在于所述的终止液无水乙醇-丙酮的体积比为：1:1。

5.根据权利要求1所述的制备生物柴油催化剂的脂肪酶酯化活力的测定方法，其特征是月桂酸和月桂醇两者的浓度均为0.2M。

6.根据权利要求1所述的制备生物柴油催化剂的脂肪酶酯化活力的测定方法，其特征是脂肪酶量为30mg-50mg。

7.根据权利要求1所述的制备生物柴油催化剂的脂肪酶酯化活力的测定方法，其特征在于脂肪酶酯化活力的测定方法按下述步骤进行：

① 月桂酸-月桂醇基准液的配制：称取20g月桂酸和18.5g月桂醇于500ml烧杯中，加入适量异辛烷使其溶解，并定容到500ml，作为基准液备用；

② 称取脂肪酶样品适量，分别置于两个三角瓶中，编号为A和B，在向两个三角瓶中分别加入10ml的月桂酸-月桂醇基准液作为底物，水加入量与底物体积比为1:1000—3:1000，迅速摇匀，将其置于30-70℃，180—220rpm的恒温摇床中，反应30分钟后，迅速从两个三角瓶中各取2ml，放入另外两个三角瓶中，加入10ml乙醇-丙酮终止液和加入100ul酚酞指示剂，终止反应后，在三角瓶中放入一枚转子，同时将pH计的探头浸入液体中，在磁力搅拌器上边搅拌，边用0.05M的NaOH标准液来滴定，直至pH等于10.3为滴定终点，记录消耗的NaOH的量V₁；

③ 空白对照为不加入脂肪酶蛋白，滴定空白时消耗的NaOH的量为V₀；

④ 将步骤②和③所得的体积带入以下计算式计算脂肪酶活力为：

其中X=脂肪酶活力（U/g·min）

1000是从mol/ml到mol/L的转化系数；

N为底物与取出滴定时用的反应液的体积比；

V₀为滴定空白时消耗的碱的体积（ml）

V₁为滴定样品时消耗的碱的体积（ml）

T为反应时间（min）；

M为脂肪酶的量（g）；

 Ｃ为NaOH溶液的浓度（mol/L）。