[发明专利]鮸鱼EST微卫星标记的特异引物及筛选方法

说明书

本申请是申请号为201110192093.9、申请日2011年07月11日、发明名称为“鮸鱼EST微卫星标记的特异引物及筛选方法”的分案申请。

技术领域

本发明属于分子生物学DNA标记技术与应用领域，具体涉及海洋经济鱼类鮸鱼（Miichthys miiuy）EST（Express Sequence Tag，表达序列标签）微卫星标记的特异引物及鮸鱼EST微卫星标记的筛选方法。

背景技术

鮸鱼(Miichthys miiuy)，属脊索动物门(Phylum Chordata)、硬骨鱼纲 (Osteichyes)、鲈形目(Perciformes)、石首鱼科(Sciaenidae )、鮸鱼属(Miichthys)，俗称米鱼、黑鮸，主要分布于西太平洋西部，包括中国的黄海及东海，朝鲜和日本南部，为近海暖温水性中下层鱼类。鮸鱼肉鲜嫩似黄鱼，无腥味，肉质可和野生大黄鱼相媲美，是海产经济鱼类之一，也是经济价值较高的鱼类，又具有个体大、生长快、食性广等诸多优点，是近海网箱养鱼优良品种。遗传改良或品种培育是鮸鱼养殖发展的动力，研究表明，遗传变异水平与生物的生长速度、抗病能力与生产性状密切相关，因此，开发鮸鱼的分子遗传标记，检测鮸鱼遗传多样性、研究其遗传结构，进而实施分子辅助育种，对于鮸鱼的育种和养殖都具有十分重要的意义。

EST是通过对 cDNA 文库的克隆子随机测序得到的 DNA 序列，能反映 mRNA 的信息，是功能基因的一部分。与gSSR标记相比，从EST序列中筛选微卫星序列（EST-SSR）更经济、更有特点：一方面具有了基因组微卫星标记的优点，同时又因EST是功能基因的表达片段，在其中发现的微卫星标记具备直接标记功能基因的优势，并可能同一些生产性状相关联，这些特点对遗传图谱构建以及标记辅助育种都有很高的应用价值。

利用EST-SSR，可能把鮸鱼重要经济性状与之关联，达到分子辅助育种的目的，并可进一步进行鮸鱼功能基因的研究。目前还未见鮸鱼EST微卫星标记的研究报道。

发明内容

本发明旨在提供鮸鱼EST微卫星标记的特异引物，以及利用该特异引物进行鮸鱼EST微卫星标记筛选的方法。

为实现本发明的发明目的，发明人提供如下技术方案：

发明人首先提供了鮸鱼EST微卫星标记的特异引物，分别为：

Mimi-5-B04：

F:CTACCGCTGCTCTTCG（SEQ ID NO.1），R:GATGGCTGGTCTACTTCG（SEQ ID NO.2）；

Mimi-13-G10：

F:GCGACAACGCAGACAGGA（SEQ ID NO.3），R:CTTGGGCGGATGGTAGGA（SEQ ID NO.4）；

Mimi-16-E10：

F:GTTCTTTCACTGGCATCT（SEQ ID NO.5），R:GCTGTTTCCACCTGTTTT（SEQ ID NO.6）；

Mimi-33-G06：

F:GGTAGGAGACTGGGTGGT（SEQ ID NO.7），R:CAATGTTTCAGGCAAATGTA（SEQ ID NO.8）；

Mimi-43-H04: 

F:GCTTCCTGTCCCGTTTAT（SEQ ID NO.9），R:TTTGCTCCCGTGGGTTAT（SEQ ID NO.10）；

Mimi-40-H12：

F:TCATCAGCACCAGCCTCT（SEQ ID NO.11），R:CACATCCTCTTACCTCCTATCT（SEQ ID NO.12）；

Mimi-41-E11: 

F:CCTCCTTCACCTCACCTT（SEQ ID NO.13），R:ACATCTGTCCAGCCTCT（SEQ ID NO.14）；

Mimi-42-G06: 

F:TTGTTGTCTCGGTGATGG（SEQ ID NO.15），R:GACTCCTGCTGTTGCTCC（SEQ ID NO.16）；

Mimi-54-A11：

F:AACCAAAGGGACCAAACG（SEQ ID NO.17），R:GGAGCAGGCAGGTAAACG（SEQ ID NO.18）；

Mimi-56-G05：