[发明专利]鮸鱼EST微卫星标记的特异引物及筛选方法

权利要求书

1.鮸鱼EST微卫星标记的特异引物，其特征是所述的特异引物为：

Mimi-13-G10：F:GCGACAACGCAGACAGGA，R:CTTGGGCGGATGGTAGGA。

2.一种鮸鱼EST微卫星标记的筛选方法，其特征是首先利用从鮸鱼cDNA文库中测序获得的EST序列，利用微卫星检索软件Tandem Repeat Finder进行微卫星位点的查找，对于2-6个碱基重复单元重复次数依次大于7，5，4，3，3次的微卫星片段进行筛选分离，从而得到含有微卫星重复的ESTs序列；然后在微卫星重复序列两端的侧翼序列设计特异引物，并进一步检测优化引物成为微卫星标记；最后对微卫星标记的重复性、稳定性和多态性进行综合评价，得到EST微卫星标记，其中，所述的筛选到的EST微卫星标记的特异引物为：

Mimi-13-G10：F:GCGACAACGCAGACAGGA，R:CTTGGGCGGATGGTAGGA。

3.如权利要求2所述的一种鮸鱼EST微卫星标记的筛选方法，其特征是所述的特异引物对鮸鱼进行PCR扩增，其中：扩增体系为：总体积20μl，其中含有内含1.5mMMg²⁺的1×PCR buffer，0.2μM dNTP，1U Taq聚合酶，模板量为50-100ng；PCR反应程序为：95°C变性5分钟之后进入循环，95°C变性30秒，退火温度退火30秒，72°C延伸30秒，进行30个循环，最终72°C延伸5分钟，各个引物的最佳退火温度在预期退火温度上下浮动10°C之间进行优化，直至预期产物清晰单一。

4.如权利要求2或3所述的一种鮸鱼EST微卫星标记的筛选方法，其特征是所述的特异引物对鮸鱼进行PCR扩增，PCR产物的检测方法如下：扩增得到的产物在用1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测扩增特异性后，再用6%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，然后再用硝酸银染色系统进行检测，分析确定多态性。

5.如权利要求4所述的一种鮸鱼EST微卫星标记的筛选方法，其特征是所述的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳主要工艺参数为：恒压1000-1500V、功率200W，电泳1-2个小时。