[发明专利]一种马铃薯中α-茄碱提取与检测的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种简单、快捷、准确的基于液质联用技术测定马铃技术薯中α-茄碱含量的前处理方法及检测技术，具体讲涉及用快速超声提取从马铃薯肉中提取α-茄碱，并用液质联用技术(LC-MS)对α-茄碱的含量进行检测的技术，

背景技术

马铃薯(Solanum tuberosum L.)又名土豆、洋芋，是继水稻、小麦、玉米的第四大粮食作物。由于马铃薯植株和块茎中普遍含有一类甾体糖苷生物碱,称为茄碱，又叫龙葵素（目前已知的龙葵素有α、β、γ-茄碱或α、β、γ-卡茄碱）具有一定毒性，在马铃薯食用过程中存在一定安全隐患。马铃薯在放置一段时间后，很容易变绿发芽，绿皮与芽中龙葵素含量会迅速上升，过多摄入（发绿马铃薯30g左右）会引起舌头发麻、恶心呕吐、腹泻、头痛、晕眩等不良反应，甚至导致中毒者抽搐、昏迷、呼吸中枢麻痹而死亡。马铃薯消费量巨大，但其检测方法与技术却存在许多问题，一定程度上阻碍了马铃薯的安全预警和质量监管。

式1龙葵素的结构式

α-茄碱是龙葵素类化合物中含量较高的一种化合物，监测α-茄碱的含量基本能反映马铃薯中龙葵素类化合物的含量。马铃薯的主要食用部分是肉，较少食用皮和芽。但目前研究却较少关注马铃薯肉中的α-茄碱及其检测方法。目前马铃薯中龙葵素检测方法有：段光明等用四氢呋喃-水-乙腈-冰乙酸搅拌浸提，蒸干，再超声提取，再离心，碱沉，用紫外法检测龙葵素类化合物，耗时长，且紫外灵敏度有限，准确度不高。肖文军等用乙酸-乙醇回流提取4小时，用高效液相检测，基本实现α-茄碱与α-卡茄碱的分离，但是分离时间长达30分钟，且当α-茄碱含量很低的时候紫外检测器很难准确定量。黄红苹等用乙酸-乙醇超声提取2次，每次40min，再加硫酸溶解，加氨水沉淀，用高效液相检测，α-茄碱与α-卡茄碱没有完全分离。这些方法都存在耗时长，操作繁琐，且对低含量的α-茄碱难以准确定量的缺点。因此，迫切需要建立一种前处理简单、灵敏度高的方法来检测马铃薯肉中α-茄碱的含量。

发明内容

本发明的目的是提供一种马铃薯中α-茄碱快速提取与检测的方法，该方法前处理快速简单、能快速准确检测出马铃薯中α-茄碱含量。

本发明的目的是提供一种马铃薯中α-茄碱快速提取与检测方法，步骤包括：

(1)α-茄碱快速提取

取新鲜马铃薯肉，用组织匀浆机粉碎成匀浆，称取样品置于瓶中，加提取液，密封后，超声提取，将提取液过膜备用；

所述的提取液为体积比=1:1的1%甲酸-水/甲醇、体积比=1:1的1%盐酸-水/甲醇、0.5%甲酸-水或0.5%盐酸-水；

所述超声提取在超声频率35kHz下提取5~15min。

(2)液质联用快速检测α-茄碱

α-茄碱m/z[M+H]⁺=868.78为目标离子，用选择离子监测模式，将标准对照液进样检测，以浓度（X，ppb）为横坐标，以峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程，根据回归方程计算α-茄碱的含量。

所述准确称取马铃薯肉0.5～1.5g；提取液的用量为50~150mL。

所述的提取液体积比=1:1的1%甲酸-水/甲醇的提取液为最佳选择。

所述超声提取过程是控制温度在35～45℃。

所述膜的孔径为0.22μm。

所述的标准对照液被逐步稀释配制成7.125ppb，14.25ppb，28.5ppb，57ppb，114ppb，228ppb，456ppb浓度的溶液进行测试，得到回归方程为：

Y=2664.1x+6505.5，R²=0.9991。

本发明中液质联用检测条件为：超高效液相色谱串联单四级杆质谱仪型号为UPLC-SQD MS，Waters；色谱柱型号为Unitary C₁₈，规格为2.1mm×150mm，5μm；流动相A为0.1%甲酸-水，流动相B为乙腈；梯度洗脱时间和洗脱液成份为0min(95%A，5%B）；5min(50%A，50%B）；6min(5%A，95%B）；柱温为35°C；流速为0.2mL/min；进样量为5μL；离子源为电喷雾离子源，ESI正离子模式检测；毛细管电压为2.8kV；锥孔电压为30V；离子源温度为120°C；脱溶剂气温度为350°C；脱溶剂气流速为600L/hr；锥孔气流速为50L/hr。

本发明的效果：