[发明专利]一种小球藻抗肿瘤多肽的制备方法

权利要求书

1.一种小球藻抗肿瘤多肽的制备方法，其特征在于具体包括如下步骤： 

（1）将小球藻粉和纯水混合后搅拌得混合溶液，在所述混合溶液中提取小球藻蛋白质，得到的粗提液作为下一次的待提取溶液进行再提取；

（2）将步骤（1）所述再提取后得到的溶液离心，去除沉淀获得蛋白上清液, 再真空冷冻干燥，获得小球藻蛋白质粉； 

（3）在步骤（2）所得的小球藻蛋白质粉中，配置浓度为1~4%（w/v）的小球藻蛋白水溶液，加入碱性蛋白酶进行水解，水解后，灭酶，冷却至室温后将水解液离心，取上清液；

（4） 步骤（3）所述上清液经截留分子量为10 KD的超滤离心管过滤，滤液再经过3 KD、5 KD的超滤离心管过滤，即获得分子量大小范围为＜3 KD、3-5 KD、5-10 KD、>10 KD的小球藻多肽水解液。

2.根据权利要求1所述的一种小球藻抗肿瘤多肽的制备方法，其特征在于步骤（1）所述小球藻粉和纯水的质量比为1:10～1:40,所述搅拌时间为30～120分钟。

3.根据权利要求1所述的一种小球藻抗肿瘤多肽的制备方法，其特征在于步骤（1）所述提取小球藻蛋白质为在温度4℃～10℃、压力50MPa～250MPa的条件下提取。

4.根据权利要求1所述的一种小球藻抗肿瘤多肽的制备方法，其特征在于步骤（1）所述再提取所提取的次数为1次～8次，每次提取的时间为10min～60min。

5.根据权利要求1所述的一种小球藻抗肿瘤多肽的制备方法，其特征在于步骤（2）所述离心为在温度4~8 ℃,转速为5000~10000 r/min下离心10~60 min。

6.根据权利要求1所述的一种小球藻抗肿瘤多肽的制备方法，其特征在于步骤（3）所述水解的条件是温度30~70 ℃，pH= 5~12， 水解时间为4~15h；所述碱性蛋白酶与小球藻蛋白质水溶液的比为1%~5%（w/v）。

7.根据权利要求1所述的一种小球藻抗肿瘤多肽的制备方法，其特征在于步骤（3）所述灭酶为在100 ℃水中灭酶10 min。

8.根据权利要求1所述的一种小球藻抗肿瘤多肽的制备方法，其特征在于步骤（3）所述离心为在 8000 r/min 下离心 25 min。

9.根据权利要求1所述的一种小球藻抗肿瘤多肽的制备方法，其特征在于步骤（4）所述过滤为在8000 g、4 ℃条件下经超滤离心管过滤。