[发明专利]烟曲霉及其在微生物制备(R,R)-肉桂醇环氧化物中的应用

说明书

（一）技术领域

本发明涉及一株产环氧化物水解酶的新菌株——烟曲霉（Aspergillus fumigatus）ZJUTZQ160及其在微生物制备（R,R）-肉桂醇环氧化物中的应用。

(二）背景技术

肉桂醇环氧化物的化学结构为：

外消旋的环氧肉桂醇由（R，R）-环氧肉桂醇和（S，S）-环氧肉桂醇两个对映体组成。

肉桂醇环氧化物（3-phenylglcidol，PG）是许多药物合成的原料和关键中间体，如(R,R)-PG是合成白三烯受体拮抗剂S0961和NK1受体(+)-L-733,060的重要原料，而(S,S)-PG是合成抗癌药物(+)-Goniotriol和(+)-Goniofufurone的原料。

利用传统的化学法制备手性的环氧化物，需要反应中添加大量溶剂和昂贵的金属催化剂，对环境造成极大的危害。生物法制备手性的环氧化物具有反应条件温和、立体选择性高、环境友好等优点。目前手性环氧肉桂醇都是用化学法合成的，生物法合成特别是环氧化物水解酶作为催化剂来合成肉桂醇环氧还未见报道。

（三）发明内容

本发明目的是为了提供一株用于制备光学纯（R,R）-肉桂醇环氧化物的新菌株——烟曲霉（Aspergillus fumigatus）ZJUTZQ160，及其在微生物法制备（R,R）-肉桂醇环氧化物中的应用。

本发明采用的技术方案是：

烟曲霉（Aspergillus fumigatus）ZJUTZQ160，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072，保藏日期2012年5月31日，保藏编号CCTCC NO：M2012199。

该菌株的菌株形态如下（参见图1）：30℃培养72h，在察氏平板培养基上的菌落呈圆形，直径2cm。初始菌落呈白色，渐变成绿色，随着培养时间更长菌落成深褐绿色。由菌落表面为同心环，菌落与培养基贴合紧密，表面平滑、致密，边缘整齐，菌落扁平，绒毛状；初生菌丝为白色，菌丝较长；基内菌丝透明，有横隔；分身孢子梗末端形成扇形的绿色分身孢子。

ZJUTZQ160的18S rDNA的序列与NCBI中的18S rDNA的序列的进行比对，发现与烟曲霉有98%的序列的同源性，ZJUTZQ160的18SrDNA部分核苷酸序列如下：

TACTTATCCGACGGATGGCGCGGGTGGGGTCCTACTGATCCGAGGTCACCTTAAAAAATAAGTTGTTTGTCGGCTGGCGCCGGCCGGGCCTACAGAGCAGGTGACAAAGCCCCATACGCTCGAGGACCGGACGCGGTGCCGCCGCTGCCTTTCGGGCCCGTCCCCCGGGAGAGGGGGACGGGGGCCCAACACACAAGCCGTGCTTGAGGGCAGCAATGACCCTCGGACAGGCATGCCCCCCGGAATACCAGGGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGACTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCCGGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTAACTGATTACGATAATCAACTCAGACTGCATACTTTCAGAACAGCGTTCATGTTGGGGTCTTCGGCGGGCGCGGGCCCGGGGGCGCAAGGCCTCCCCGGCGGCCGTCGAAACGGCGGGCCCGCCGAATCAACAAGGTACGATAGACACGGGTGGGAGGTTGGACCCAGAGGGCCCTCACTCGGTAATGATCCTTCCGCAGGTTCACCTAC

综合上述结果，该菌株被鉴定为烟曲霉（Aspergillus fumigatus）。

本发明所涉及的微生物是通过以下的程序筛选得到的：

（1）将全国各地采回的土样接种到初筛培养基中，在30℃，200rpm的摇床上培养3天，吸取少量培养液划线至霉菌平板培养基上，30℃恒温箱培养。然后挑取单菌落转接入试管斜面，30℃恒温箱培养2~3d后取出，保存于4℃冰箱。初筛培养基的配方：NaNO₃2.0g/L，K₂HPO₄·3H₂O1.0g/L，KCl0.5g/L，MgSO₄·7H₂O0.5g/L，蔗糖30g/L，黄豆粉10g/L，0.1%（v/v）底物，pH4.0。