[发明专利]动物疫病三色荧光RT-PCR检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种动物疫病三色荧光RT-PCR检测试剂盒，包括多重荧光RT-PCR反应母液、阳性对照品、阴性对照品、AMV逆转录酶、Taq聚合酶，其特征在于：多重荧光RT-PCR反应母液含有多重10×荧光RT-PCR反应缓冲液、禽流感引物、禽流感探针、新城疫引物、新城疫探针、禽传染性支气管炎引物、禽传染性支气管炎探针、牛血清白蛋白，其中各引物及探针的序列如下：

禽流感病毒上游引物AIVPf:5′-GTCTTCTAACCGAGGTCGAAAC-3′

禽流感病毒下游引物AIVPr:5′-CCCTGCAAAGACATCTTCAAGT-3′

禽流感病毒荧光探针AIVPb:5′-FAM-CCCCTCAAAGCCGAGATCGCGC-BHQ1-3′

新城疫病毒上游引物NDVPf:5′- GCCGATAATGGCACCTATAAA-3′

新城疫病毒下游引物NDVPr:5′- CCCTTGGTGATTCTATCCGC-3′

新城疫病毒荧光探针NDVPb1：5′-HEX- CGTTTTTGTCTCCTTCCTCCAGACG-BHQ1-3′

新城疫病毒荧光探针NDVPb2：5′-HEX- CGTCTCTGCCTCCTTCCTCCGGACG-BHQ1-3′

禽传染性支气管炎病毒上游引物AIBVPf:5′-GCCTGGAAACGAACGGTAG-3′

禽传染性支气管炎病毒下游引物AIBVPr:5′-TCCTAGTGCTGTACCCTCGG-3′

禽传染性支气管炎病毒荧光探针AIBVPb: 5′-ROX-CCCCGGCACTGGCATCTTTATACCT-BHQ1-3′。

2.根据权利要求1所述的动物疫病三色荧光RT-PCR检测试剂盒，其特征在于：所述的多重10×PCR反应缓冲液组成如下：三羟甲基氨基甲烷盐酸终浓度为100mM、氯化钾终浓度为500mM、甘油体积比为50%、四种单核苷酸单体终浓度为0.4mM，氯化镁终浓度为3mM及相应体积的超纯水。

3.根据权利要求2所述的动物疫病三色荧光RT-PCR检测试剂盒，其特征在于：所述的多重荧光RT-PCR反应母液配制如下：多重10×PCR反应缓冲液 5ul；浓度为20mg/ml的牛血清白蛋白1ul；浓度均为100μM的引物 AIVPf、AIVPr、NDVPf、NDVPr、AIBVPf和AIBVPr各0.4ul；浓度均为50μM的探针AIVPb、NDVPb和AIBVPb各0.3ul；无RNA酶DEPC水 31.5ul，配制混合后于冰箱-20℃保存。