[发明专利]一种疫苗中非特异性核酸内切酶活性检测试剂盒

权利要求书

1.一种疫苗中非特异性核酸内切酶活性检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：

NE反应体系和荧光探针；

或NE反应体系和荧光染料。

2.根据权利要求1所述的一种疫苗中非特异性核酸内切酶活性检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括连续记录荧光信号的仪器。

3.根据权利要求1所述的一种疫苗中非特异性核酸内切酶活性检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括定量PCR仪或荧光检测仪。

4.根据权利要求1所述的一种疫苗中非特异性核酸内切酶活性检测试剂盒，其特征在于，所述的NE反应体系为通用反应缓冲液或系列反应缓冲液；所述的通用反应缓冲液其成分包括Tris·HCl，浓度为10-100mM，pH范围为5～9.5，还含有浓度为1mM-20mM的Ca²⁺、Zn²⁺或Mg²⁺；所述系列反应缓冲液指分别针对单一酶设计的缓冲液组分，每组2-5种，其区别在于设计不同的pH值，使同一样品在不同pH值下测定活性比，对照标准品获得酶种类信息；所述的荧光探针为一寡聚核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团；探针完整时，报告荧光基团发射的荧光信号被淬灭荧光基团吸收；所述的荧光染料是指能特异性地掺入DNA双链，在激发光下发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号的物质，当NE把DNA双链降解后，发射的荧光信号减弱。

5.根据权利要求4所述的一种疫苗中非特异性核酸内切酶活性检测试剂盒，其特征在于，所述的通用反应缓冲液其成分包括Tris·HCl，浓度为20-50mM，pH范围为5.4～8.5，还含有浓度为2mM-10mM的Ca²⁺、Zn²⁺或Mg²⁺。

6.根据权利要求4所述的一种疫苗中非特异性核酸内切酶活性检测试剂盒，其特征在于，所述NE反应体系和荧光染料中，NE反应体系需事先加入DNA标准品，用量为1-500ng/μl。

7.根据权利要求4所述的一种疫苗中非特异性核酸内切酶活性检测试剂盒，其特征在于，所述的荧光探针为长度10-30bp的寡聚核苷酸序列，5’末端标记发色基团，包括但不限于FAM、TET、HEX、TAMRA、ROX、CY5、CY3、JOE，3’末端标记淬灭基团，包括但不限于BHQ-1、BHQ-2、Eclipse、DABCYL；探针的使用量为每反应1μM～20μM。

8.根据权利要求7所述的一种疫苗中非特异性核酸内切酶活性检测试剂盒，其特征在于，所述的荧光探针的使用量为每反应2μM～10μM。

9.根据权利要求4所述的一种疫苗中非特异性核酸内切酶活性检测试剂盒，其特征在于，所述的荧光染料包括但不限于pico green、SYBR系列荧光染料，荧光染料在NE反应体系中应用浓度为1ng-100ng/100ul(0.1～10X)。

10.根据权利要求1-9任一权利要求所述的一种疫苗中非特异性核酸内切酶活性检测试剂盒，其特征在于，检测步骤如下：取反应缓冲液，加入荧光探针或荧光染料，放置冰上，3-5min后，加入酶样品；同时设置阳性对照和空白对照；放入荧光检测仪器，事先设定仪器温度为25℃或37℃，启动记录程序，记录20-30min内荧光信号变化。