[发明专利]一种改进的海带染色体的制备方法

权利要求书

1.一种改进的海带染色体的制备方法，其步骤是：

(1)海带配子体预处理：海带配子体离心后吸除多余水分保留海带配子体沉淀，并加入秋水仙素溶液振荡摇匀静置；

(2)海带配子体低渗：海带配子体用氯化钾溶液低渗；

(3)海带配子体固定：低渗后的海带配子体用卡诺固定液进行固定；

(4)酶解去壁：用纤维素酶R-10溶液、果胶酶溶液、离析酶R-10溶液的混合酶液进行酶解去壁；

(5)冷滴片：酶解去壁后的海带配子体离心后用移液枪吸除上清液，加入冰乙酸，振荡混匀成细胞悬液，用滴管吸取细胞悬液在离预冷的载玻片的上面滴片，载玻片底面经过酒精灯火焰烧一次后自然晾干或烘干；

(6)姬姆萨染色：对附着在载玻片上的海带配子体染色体采用姬姆萨染色液进行染色；

(7)显微镜下观察和拍照。

2.根据权利要求1所述一种改进的海带染色体的制备方法，其特征在于：步骤(1)的秋水仙素溶液为重量体积比为0.2％的秋水仙素溶液，海带配子体加入0.2％的秋水仙素溶液后于4℃下静置7～8小时。

3.根据权利要求1所述一种改进的海带染色体的制备方法，其特征在于：步骤(2)的氯化钾溶液的浓度为0.075mol/L，海带配子体沉淀加入浓度为0.075mol/L的氯化钾溶液后振荡摇匀，在室温下静置30～40分钟。

4.根据权利要求1所述一种改进的海带染色体的制备方法，其特征在于：步骤(3)的卡诺固定液是由甲醇和冰乙酸按3∶1的体积比配置，卡诺固定液4℃下固定三次，每次20分钟，最后再换新的卡诺固定液4℃下固定24小时。

5.根据权利要求1所述一种改进的海带染色体的制备方法，其特征在于：在步骤(4)中，纤维素酶R-10溶液、果胶酶溶液、离析酶R-10溶液按2∶1∶1的体积比混合摇匀后成为混合酶液，现配现用，4℃下放置。

6.根据权利要求1所述一种改进的海带染色体的制备方法，其特征在于：在步骤(5)中，离预冷的载玻片30～40厘米的高度进行滴片。