[发明专利]一种miRNA的原位杂交探针及其检测试剂盒和应用有效
| 申请号： | 201210185570.3 | 申请日： | 2012-06-06 |
| 公开（公告）号： | CN102732619A | 公开（公告）日： | 2012-10-17 |
| 发明（设计）人： | 李江超;关新元;李焱 | 申请（专利权）人： | 中山大学肿瘤防治中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州新诺专利商标事务所有限公司 44100 | 代理人： | 曹爱红 |
| 地址： | 510060 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 mirna 原位杂交 探针 及其 检测 试剂盒 应用 | ||
1.一种miRNA的原位杂交探针，其特征在于，所述杂交探针中的碱基的五碳环第2位碳原子修饰了一个氟原子。
2.根据权利要求1所述的原位杂交探针，其特征在于，所述杂交探针的序列为5’－3’：AGCCTATGGAATTCAGTTCTCA，其中第3、6、15、20个碱基五碳环第2位碳原子修饰了一个氟原子。
3.根据权利要求1所述的原位杂交探针，其特征在于，所述杂交探针的序列为5’－3’：TCACGCGAGCCGAACGAACAAA，其中第3、8、13、21个碱基五碳环第2位碳原子修饰了一个氟原子。
4.根据权利要求1-3之一所述的原位杂交探针，其特征在于，所述杂交探针的5’和3’端修饰地高辛。
5.一种含有权利要求1-3之一所述的原位杂交探针的miRNA的原位杂交检测试剂盒。
6.根据权利要求5所述的原位杂交检测试剂盒，其特征在于，还包括对照探针、预杂交液、封闭液和标记物。
7.根据权利要求6所述的原位杂交检测试剂盒，其特征在于，所述对照探针的序列为5’－3’：AGTCTATGGTATTCAGTACTCA；20ml所述预杂交液中含20×SSC 4ml、硫酸葡聚糖4g、去离子甲酰胺10ml、Poly A(10mg/ml)0.5ml、鱼精ssDNA(10mg/ml)0.5ml、tRNA(10mg/ml)0.5ml、1M二硫代苏糖醇(DTT)2ml、50*Denhardt’s 0.2ml；所述封闭液为：PBS中加入0.1%Triton-X100、3%正常山羊血清、3%BSA；所述标记物为碱性磷酸酶荧光底物。
8.如权利要求2所述的原位杂交探针在制备肺癌细胞系或肺癌组织的miRNA原位杂交检测试剂盒中的应用。
9.如权利要求3所述的原位杂交探针在制备食管癌细胞系或食管癌组织的miRNA原位杂交检测试剂盒中的应用。
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