[发明专利]一种从松花粉中分离制备粗蛋白及酶解肽类的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从松花粉中分离制备粗蛋白及酶解肽类的方法。

背景技术

松花粉为松科植物马尾松、油松或同属植物的花粉，是中国医学宝库中药食兼用品种，作为中国传统的药材，其药食兼用的历史已逾数千年，主要分布我国浙江、江苏、河北、辽宁、吉林、湖北等地。干燥松花粉为淡黄色的细粉末，呈均匀的小圆粒，体质轻飘，易飞扬，有滑润感，不沉于水，气微香，味有油腻感。松花粉含有多种营养成分，包括蛋白质、氨基酸、单糖、多糖、核酸、矿物质等多种活性成分。近代科学研究发现松花粉具有增强免疫力、抗疲劳、抗衰老、保护心血管等多种功能活性作用。

酶解肽类是以动、植物食物蛋白源为原料，经过生物酶水解、分离、精制得到的小分子蛋白（肽）的混合物，是存在于动物、植物、微生物体内的天然生物活性肽和蛋白质降解后产生的外源性生物活性肽。酶解肽分子量分布在一定范围，来源广、种类多，具有被人体快速吸收的特点，并根据蛋白来源的不同和分解程度不同具有抗氧化、调节免疫力、降血压等多种生理活性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种从松花粉中分离制备粗蛋白及酶解肽类的生产方法，充分利用了松花粉这一宝贵的植物资源。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种从松花粉中分离制备粗蛋白及酶解肽类的方法，包括以下步骤：

1）将所述松花粉进行破壁处理，得到破壁松花粉；

2）对步骤1）中得到的破壁松花粉依次进行Tris-HCl溶液浸提、第一次离心、抽滤，得到分离液，

其中，所述破壁松花粉与所述Tris-HCl溶液的体积百分比为1：20～30；

3）将固体硫酸铵粉末加入到步骤2）中得到的分离液中，至硫酸铵硫酸铵达到100%饱和度，再进行蛋白质盐析并进行搅拌，得到盐析液，再将所述盐析液进行离心，得到沉淀物；

4）向步骤3）中得到的沉淀物中再加入Tris-HCl溶液，不断搅拌至均匀，再进行三蒸水透析，得到透析内液；

5）对步骤4）中得到透析内液进行真空冷冻干燥处理，即得到所述粗蛋白粉；

6）对步骤5）中得到的粗蛋白粉用三蒸水复溶，得到蛋白液，调节蛋白液的浓度及pH值，再放入水浴锅中恒温水浴，再加入碱性蛋白酶，进行酶解，得到多肽混合液，再将酶解后的多肽混合液放入沸水浴中，钝化蛋白酶使其失活，取出后，迅速冷却，然后再进行第三次离心，取上清，冷冻干燥，即得酶解肽类。

本发明的有益效果是：应用本发明方法制备的松花粉蛋白及其酶解肽类，具有很高的营养价值，易于人体吸收，可用作食品和保健食品的原料。

将酶解后的多肽混合液放入沸水浴中，钝化蛋白酶使其失活，取出后，迅速冷却，可防止其残余的碱性蛋白酶对肽进行破坏。

松花粉外观为淡黄色细粉末，质体轻扬，极易飞散，手捻有润滑感，具有流体特性，破壁后松花粉物理性状发生改变，流体特性丧失，破壁花粉黏附性很强。

从松花粉破壁前后的显微形态及营养成分分析看，破壁松花粉中总能量、总脂、淀粉含量明显提高。破壁后粗蛋白从12.7%上升为13.1％，淀粉从5.4%增为7.0%；总脂从7.3%增加到10.0%；总能量破壁后增加约5%；天然松花粉粗灰分为3.1%，松花粉破壁后粗灰分有所提高，达到3.5%。天然松花粉进行破壁处理，可使其中某些营养成分得以充分释放。

所述Tris-HCl溶液中Tris是指三羟甲基氨基甲烷，Tris-HCl溶液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂，还有许多重要用途。Tris-HCl溶液被用于不同pH条件下的蛋白质晶体生长。Tris-HCl溶液的低离子强度特点可用于线虫（C.elegans）核纤层蛋白（lamin）的中间纤维的形成。Tris-HCl溶液也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一。

所述浸提系指将药材中的可溶物转移到适宜溶剂中的过程。本发明的浸提方法为浸渍法。

所述盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程。所述蛋白质盐析是指向蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后，可以降低蛋白质的溶解度，使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析，可复原。

水的多次蒸馏可以提高水的电阻率，比如自来水电阻率为1900欧姆。一次蒸馏水的电阻率为0.35兆欧，二次为1.0兆欧，三次为1.5兆欧，28次为16兆欧，根据实验用水的不同要求可以选择不同的多次蒸馏水。主要看实验类型，要求用一次水的实验可以用二次水，要求不严。所谓的二蒸水，一般多用于常规的化学检验，三蒸水，一般多用于生物和医疗上的检验。