[发明专利]一种从松花粉中分离制备粗蛋白及酶解肽类的方法

权利要求书

1.一种从松花粉中分离制备粗蛋白及酶解肽类的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将所述松花粉进行破壁处理，得到破壁松花粉；

2）对步骤1）中得到的破壁松花粉依次进行Tris-HCl溶液浸提、第一次离心、抽滤，得到分离液，

其中，所述破壁松花粉与所述Tris-HCl溶液的体积百分比为1：20～30；

3）将固体硫酸铵粉末加入到步骤2）中得到的分离液中，至硫酸铵硫酸铵达到100%饱和度，再进行蛋白质盐析并进行搅拌，得到盐析液，再将所述盐析液进行离心，得到沉淀物；

4）向步骤3）中得到的沉淀物中再加入Tris-HCl溶液，不断搅拌至均匀，再进行三蒸水透析，得到透析内液；

5）对步骤4）中得到透析内液进行真空冷冻干燥处理，即得到所述粗蛋白粉；

6）对步骤5）中得到的粗蛋白粉用三蒸水复溶，得到蛋白液，调节蛋白液的浓度及pH值，再放入水浴锅中恒温水浴，再加入碱性蛋白酶，进行酶解，得到多肽混合液，再将酶解后的多肽混合液放入沸水浴中，钝化蛋白酶使其失活，取出后，迅速冷却，然后再进行第三次离心，取上清，冷冻干燥，即得酶解肽类。

2.根据权利要求1所述的从松花粉中分离制备粗蛋白及酶解肽类的方法，其特征在于，在步骤2）与步骤3）之间还包括以下步骤：将步骤2）的步骤再重复一遍或者两遍，得到分离液，并与步骤2）中得到的分离液合并。

3.根据权利要求1或2所述的从松花粉中分离制备粗蛋白及酶解肽类的方法，其特征在于，所述松花粉为马尾松、油松、黄山松、白皮松、红松、华山松中的任意一种或几种的花粉。

4.根据权利要求1或2所述的从松花粉中分离制备粗蛋白及酶解肽类的方法，其特征在于，在步骤2）及步骤4）中，所述Tris-HCl溶液的pH值均为8~9。

5.根据权利要求1或2所述的从松花粉中分离制备粗蛋白及酶解肽类的方法，其特征在于，在步骤2）中，所述浸提的工艺条件为：在4℃的温度下，搅拌浸提5~8小时；所述第一次离心的工艺条件为：离心时间为10~25分钟，转速为10000~12000rpm。

6.根据权利要求1或2所述的从松花粉中分离制备粗蛋白及酶解肽类的方法，其特征在于，在步骤3）中，所述搅拌的时间为30~60min；所述对盐析液进行离心的工艺条件为：离心时间为10~20分钟，转速为10000~12000rpm。

7.根据权利要求1或2所述的从松花粉中分离制备粗蛋白及酶解肽类的方法，其特征在于，在步骤4）中，所述进行透析的时间为3天，进行透析所用的透析袋分子量为10000~14000Da。

8.根据权利要求1或2所述的从松花粉中分离制备粗蛋白及酶解肽类的方法，其特征在于，在步骤6）中，所述蛋白液的浓度为3%~5%，pH值为8~10；所述进行恒温水浴的水浴温度为50℃~60℃。

9.根据权利要求1或2所述的从松花粉中分离制备粗蛋白及酶解肽类的方法，其特征在于，在步骤6）中，所述加入碱性蛋白酶浓度为0.06%~0.08%，使得酶活性达到4000U/g~6000U/g；所述进行酶解的时间为2～4小时。

10.根据权利要求1或2所述的从松花粉中分离制备粗蛋白及酶解肽类的方法，其特征在于，在步骤6）中，所述进行沸水浴的温度为95~100℃，时间为10分钟；所述第三次离心的工艺条件为：离心时间为20~30分钟，转速为10000~12000rpm。