[发明专利]一种检测氧氟沙星的酶联免疫试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种检测氧氟沙星的酶联免疫试剂盒，其特征在于它是由带微孔包被板，氧氟沙星标准品，抗氧氟沙星的抗体，氧氟沙星酶标抗原，浓缩洗涤液，显色液A，显色液B和终止液所组成；所述包被板上的封闭液为1％明胶，抗氧氟沙星的抗体稀释液为0.15mol/L的磷酸盐缓冲溶液，浓缩洗涤液为含有0.07％～0.1％吐温的Tris-HCL缓冲溶液，显色液A为柠檬酸和柠檬酸钠缓冲溶液，显色液B为四甲基联苯胺和二甲基亚砜、含甘油的溶液，终止液为2mol/L的硫酸溶液；所述的抗氧氟沙星的抗体是通过先合成氧氟沙星半抗原，在将氧氟沙星半抗原与载体蛋白通过碳化二亚胺法得到的偶联物即全抗原，以此全抗原免疫新西兰兔，得到对氧氟沙星特异性的抗体。

2.根据权利要求1所述的检测氧氟沙星的酶联免疫试剂盒，其特征在于其中的氧氟沙星酶标抗原是以辣根过氧化物酶用EDC法合成酶标抗原OFL-HRP，并利用紫外分光光度计进行鉴定。

3.根据权利要求1所述的检测氧氟沙星的酶联免疫试剂盒，其特征在于其中的氧氟沙星标准品是从干粉中稀释得到，稀释液为0.15mol/L的磷酸盐缓冲溶液，共6瓶，氧氟沙星浓度分别为：0ug/L，0.1ug/L，1.0ug/L，5ug/L，25ug/L，100ug/L。

4.根据权利要求1所述的检测氧氟沙星的酶联免疫试剂盒，其特征在于其中的抗氧氟沙星的抗体为多克隆抗体，它们均是用氧氟沙星半抗原与载体蛋白的偶联物作为免疫原得到的；所述的氧氟沙星半抗原是将氧氟沙星和EDC法作用得到；所述的载体蛋白为匙孔蓝蛋白。

5.一种利用如权利要求1或2或3或4所述的检测氧氟沙星的酶联免疫试剂盒进行氧氟沙星的检测方法，其特征在于：取包被抗氧氟沙星-KLH抗体的微孔包被板，加入氧氟沙星标准品或处理好的样品到各自的微孔中，再加入酶标的氧氟沙星抗原，震荡反应，洗涤液洗涤，加显色液A和显色液B，避光放置后加终止液，在450nm-630nm处测量吸光值，对照标准曲线计算样品中的氧氟沙星含量。

6.根据权利要求5所述的氧氟沙星的检测方法，其特征在于：取包被有抗氧氟沙星-KLH抗体的微孔包被板，用洗涤液洗涤1次，加入100ul氧氟沙星标准品和处理好的样品到各自的微孔中，同时加入50ul酶标氧氟沙星抗原，震荡混匀，37℃孵育10分钟左右，洗涤液洗涤三次，加50ul显色液A和50ul显色液B，37℃孵育15分钟后加终止液，在450nm-630nm处测量吸光值，对照标准曲线计算样品中的氧氟沙星含量。

7.根据权利要求5所述的氧氟沙星的检测方法，其特征在于所述的检测方法包括如 下步骤：

(1)实验前将所有试剂盒组件在室温中平衡30分钟；

(2)配制酶标抗原工作液和洗板工作液；

(3)取出需要数量的微孔板，每个标准品和样本做2个平行，并记录标准孔和样本孔的位置；

(4)每孔加入250μl洗板工作液，轻轻震荡下，放置1min，倒掉洗液拍干，洗涤1次；

(5)每孔依次加入标准品和样品各50μl，每孔再加入配制好的酶标抗原工作液各50μl，充分混匀1min，37℃反应30min；

(6)取出反应板，每孔加入250μl洗板工作液，轻轻震荡下，放置1min，倒掉洗液拍干，洗涤3次；

(7)每孔加入显色液A液和B液各50uL，避光37℃显色15min；

(8)每孔加入终止液各50uL，用酶标仪在波长450nm/630nm处读取吸光度值。

8.根据权利要求6或7所述的氧氟沙星的检测方法，其特征在于：处理好的样品是根据前处理方法确定，具体是：用匀浆机搅匀样本，取1g匀质样本，加入处理液2mL，充分混匀10min，用离心机5000rpm离心15min，取上层液，用PBS稀释2倍左右后可以进行测定，且本前处理的方法可以用于猪肉、猪肝、虾、鱼、甲鱼、鸡肉中氧氟沙星的检测。