[发明专利]具有HIV-1蛋白酶抑制活性的寡肽化合物及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种分离的寡肽化合物或其药学上可接受的盐，所述寡肽化合物具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列：Tyr-Leu-Val-Leu-His，

优选地，所述寡肽化合物是未经修饰的寡肽，或者是含有经修饰的氨基酸残基的寡肽；

优选地，所述寡肽化合物含有至少一个（例如2个，3个，4个或5个）经修饰的氨基酸残基；

优选地，所述寡肽化合物含有经取代的酪氨酸残基，例如N-取代的酪氨酸残基，N,N-二取代的酪氨酸残基或N,N,N-三取代的酪氨酸残基；优选地，所述酪氨酸残基上的取代基包括但不限于，低级烷基例如C_1-4烷基（例如甲基，乙基，正丙基，异丙基或丁基），低级烷氧基例如C_1-4烷氧基；优选地，经取代的酪氨酸残基是N,N,N-三甲基取代的酪氨酸残基；

优选地，所述寡肽化合物含有经修饰的组氨酸残基，例如脱氢组氨酸残基；

优选地，所述寡肽化合物具有下式的结构：

2.一种获自放线菌的提取物，其包含权利要求1的寡肽化合物，优选地，所述提取物获自放线菌CGMCC 4766；

优选地，所述寡肽化合物具有下式的结构：

3.制备权利要求1的寡肽化合物的方法，其包括以下步骤：

(1)培养放线菌，并分别收集上清液和菌丝体；

(2)对步骤1获得的上清液和/或获得的菌丝体的裂解液和/或提取液进行层析，跟踪并收集具有HIV-1蛋白酶抑制活性的洗脱级分；

(3)使用制备型高效液相色谱法对步骤2获得的洗脱级分进行纯化，从而获得所述寡肽化合物；

优选地，步骤1中的放线菌是放线菌CGMCC 4766；

优选地，在步骤2中对上清液和/或菌丝体的裂解液和/或提取液进行一次或多次层析，例如使用大孔吸附树脂和反相或者正相硅胶对所述溶液进行层析（例如柱层析）；

优选地，使用高通量荧光底物HIV-1蛋白酶模型对各个洗脱级分进行活性跟踪，以收集具有HI V-1蛋白酶抑制活性的洗脱级分；

优选地，通过用丙酮浸泡菌丝体，然后将菌丝体和丙酮去除来获得菌丝体的提取液；

优选地，在低温环境下进行步骤2，以避免所述寡肽化合物的活性丧失。

4.制备权利要求2的提取物的方法，其包括以下步骤：

(1)培养放线菌，并分别收集上清液和菌丝体；

(2)对步骤1获得的上清液和/或获得的菌丝体的裂解液和/或提取液进行层析，跟踪并收集具有HIV-1蛋白酶抑制活性的洗脱级分，从而获得本发明的提取物；

任选地，所述方法还包括下述步骤：

(3)对步骤2获得的提取物进行进一步的纯化；

优选地，步骤1中的放线菌是放线菌CGMCC 4766；

优选地，在步骤2中对上清液和/或菌丝体的裂解液和/或提取液进行一次或多次层析，例如使用大孔吸附树脂和反相或者正相硅胶对所述溶液进行层析（例如柱层析）；

优选地，使用高通量荧光底物HIV-1蛋白酶模型对各个洗脱级分进行活性跟踪，以收集具有HIV-1蛋白酶抑制活性的洗脱级分；

优选地，通过用丙酮浸泡菌丝体，然后将菌丝体和丙酮去除来获得菌丝体的提取液；

优选地，在低温环境下进行步骤2，以避免所述提取物中所包含的寡肽化合物的活性丧失；

优选地，在步骤3中使用制备型高效液相色谱法，对步骤2获得的提取物进行进一步的纯化。

5.一种药物组合物，其包含权利要求1的寡肽化合物或其药学上可接受的盐，或权利要求2的提取物，或者通过权利要求3的方法获得的寡肽化合物，或通过权利要求4的方法获得的提取物，以及药学上可接受的载体、助剂或赋形剂。

6.权利要求1的寡肽化合物或其药学上可接受的盐，或权利要求2的提取物，或者通过权利要求3的方法获得的寡肽化合物，或通过权利要求4的方法获得的提取物用于制备药物的用途，所述药物用于预防或治疗与HI V感染相关的疾病，例如艾滋病。

7.权利要求1的寡肽化合物或其药学上可接受的盐，或权利要求2的提取物，或者通过权利要求3的方法获得的寡肽化合物，或通过权利要求4的方法获得的提取物用于制备药物的用途，所述药物用于抑制HIV-1蛋白酶的活性。