[发明专利]一种利用豆粕固态发酵产活性肽的方法

说明书

技术领域

本发明属于发酵技术领域，具体涉及一种利用豆粕固态发酵产活性肽的方法。

背景技术

豆粕是大豆经浸提脱油后的碎片状或粗粉状副产品，目前主要用于动物饲料。豆粕含有丰富的蛋白质，且氨基酸分布合理，如果采用先进的生物技术将蛋白和氨基酸充分利用，将大大提高再生资源的利用率并提高大豆生产的经济效益。

豆粕蛋白的利用可以借鉴大豆蛋白的生产方式。目前，大豆多肽的生产已经完全实现工业化。它是大豆蛋白经酸、碱或酶水解后得到的由不同氨基酸组成的多肽链，一般平均肽链长度为3-10 个氨基酸残基，主要分子量范围为300-3 000 Da的低分子量短链肽。大豆肽的生产主要有酶解法和微生物发酵法。酶解法是利用蛋白酶在最适温度和pH 条件下进行大豆蛋白的酶解反应，把大分子蛋白降解为小分子肽类，再经加工精制生产出大豆肽产品; 微生物发酵法以大豆蛋白或豆粕为原料，应用产蛋白酶的细菌或霉菌，经过发酵作用，得到具有良好功能性与营养特性的大豆肽，而且生产成本低，已成为国内外的研究热点。

黑曲霉、米曲霉和枯草芽孢杆菌是实验室中固态发酵豆粕常用的菌种，因此，本专利以黑曲霉为出发菌株，以豆粕粉为主要生产原料，采用固态发酵法，以多肽转化率为指标对发酵过程中的发酵条件进行优化，单因素试验优化的发酵条件为: 发酵时间102 h，发酵温度32℃，接种量4%。

发明内容

本发明提供了一种利用豆粕固态发酵产活性肽的方法，本专利以黑曲霉为出发菌株，以豆粕粉为主要生产原料，采用固态发酵法，以多肽转化率为指标对发酵过程中的发酵条件进行优化，单因素试验优化的发酵条件为: 发酵时间102 h，发酵温度32℃，接种量4%。

1.      一种利用豆粕固态发酵产活性肽的方法，其特征在于首先将豆粕粉碎，配料计量后进行灭菌处理；将黑曲霉划线接入斜面培养基，用于菌种的活化，然后将活化菌株接入液体培养基扩大培养；将扩大培养的菌种接入到豆粕培养基中，其料水比按1:1，用于制备大豆肽；发酵后于60℃烘干制样，以多肽转化率为指标对发酵过程中的发酵条件进行优化。

2.      步骤1所述的斜面培养基: 察氏固体培养基；液体培养基为察氏液体培养基；豆粕培养基: 豆粕1 g、麸皮9 g、水100 mL、蔗糖2 g，原料豆粕不灭菌，培养基的pH为自然。

3.      步骤1所述的多肽的提取及其转化率的计算方法分别为：称取5 g发酵产品(精确至0.0001 g)，加蒸馏水20 mL，50℃下水浴6 h，然后在121℃下灭酶10 min，冷却后加入5 mL 10%三氯乙酸溶液，混合均匀，再加入10 mL 5%三氯乙酸溶液，静置沉降5 min 后转到离心管中，在4 000 r/min下离心10 min，取上清液并转到25 mL 比色管中定容。用双缩脲法测定上清夜中的多肽含量：

。

4.      步骤1所述的最佳发酵时间为112 h。

5.      步骤1所述的最佳发酵温度为29℃。

6.      步骤1所述的最佳接种量为6%。

附图说明

图1发酵时间对大豆肽转化率的影响。

图2 发酵温度对大豆肽转化率的影响。

图3 接种量对大豆肽转化率的影响。

具体实施方式

下面的实施例对本发明作详细说明，但对本发明没有限制。

本专利所用的菌株为黑曲霉，购自于ATCC，编号为:30132。

实施例1  

本实施例说明发酵时间对大豆肽转化率的影响，固定发酵温度为32℃，接种量为2%，发酵时间选取94、100、106 和112 h，结果见图1。

从图1可以看出，随着发酵时间延长，多肽转化率逐渐增大，当达到112 h 时，转化率达到最高值27.46%，以后肽转化率趋于下降。这是由于开始阶段，菌种繁殖产蛋白酶活性增强，蛋白酶水解大豆蛋白使大豆多肽含量增大; 当大豆肽达到一定浓度会产生反馈抑制，同时产生的游离氨基酸越来越多。

 实施例2

本实施例说明发酵温度对大豆肽转化率的影响，固定发酵时间为112 h，接种量为2%，选取发酵温度为21、25、29 和33℃，结果见图2。

从图2可以看出，随着发酵温度的不断提高，大豆肽转化率增大。在29℃时达到最大值29.42%，然后趋于平缓，所以试验选取的温度应为29℃。

 实施例3