[发明专利]微生物发酵生产谷氨酸脱氢酶的方法

权利要求书

1.一种微生物发酵生产谷氨酸脱氢酶(简写为GDH)的方法，其包括以下步骤：

(1)将产生GDH的微生物进行6～10次活化，再经过产物定向驯化4～6次，使其在24～30℃环境条件下生长良好；

(2)按常规方法将产物定向驯化后的GDH产生菌在24～30℃逐级扩大培养，制备成液体一级种子和二级种子；

(3)将液体一级种子或二级种子，按发酵液体积的3～9％接种量接入液体发酵培养基中，在24～30℃培养60～114h时，即微生物发酵生产GHD结束；

(4)将(3)的发酵液在6,000～8,000rpm离心收集液体，用蒸馏水洗涤数次之后离心收集沉淀；

(5)将沉淀悬浮于缓冲液中，加石英砂研磨破碎，10,000～14,000rpm离心，收集到的上清为DGH粗酶液；

(6)根据不同需要和使用对象不同，将(5)得到的粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。

2.根据权利要求1所述的方法，在步骤(6)之后进一步包括：将步骤(6)得到的粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中菌种定向驯化培养基、液体种子培养基、发酵产酶培养基分别为：

(1)菌种定向驯化培养基：葡萄糖8.0～12.0g，蛋白胨18.0～22.0g，牛肉膏16.0～24.0g，NaCl 4.0～6.0g，pH值自然，121℃高压蒸汽灭菌30min。

(2)液体种子培养基：葡萄糖22.0～26.0g，玉米浆24.0～28.0g，尿素1.5～3.5g，K₂HPO₄ 1.0～2.5g，MgSO₄ 0.4～0.8g，FeSO₄ 0.002～0.006g，MnSO₄ 0.004～0.008g，自来水1.0L，pH值自然，121℃高压蒸汽灭菌30min。

(3)发酵产酶培养基：葡萄糖25.0～45.0g，玉米浆4.0～8.0g，尿素4.0～6.0g，K₂HPO₄ 0.5～2.5g，FeSO₄ 0.001～0.004g，MgSO4 5.0～7.0g，MnSO₄ 0.002～0.005g，自来水1.0L，pH值自然，121℃高压蒸汽灭菌30min。