[发明专利]检测鸡产蛋下降综合征病毒的方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测鸡产蛋下降综合征病毒的遗传标记物，其具有SEQ ID No.1所示的序列或其特异性片段。

2.用于扩增权利要求1所述遗传标记物的特异性引物。

3.根据权利要求2所述的引物，其核苷酸序列为：

Taq-EHFP：5’-GACCGGTCACAAAAACTTCATCT-3’，

Taq-EHRP：5’-CACAATCCTGTTATCACCCACATTT-3’。

4.与权利要求2或3所述引物配合使用的荧光探针。

5.根据权利要求4所述的荧光探针，其核苷酸序列为：

5’FAM-CGCATCGTCCCGATCCAAACAGA-BHQ3’。

6.一种用于实时荧光定量PCR方法检测鸡产蛋下降综合征病毒的标准质粒，其含有EDSV特异性片段，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，用于扩增该序列的特异性引物为：

EHF：5’-AAACGGTGTTACCACTGAC-3’，

EHR：5’-AGCTGCTACCCATATCCA-3’。

7.一种鸡产蛋下降综合征病毒的检测方法，其特征在于，以权利要求6所述的标准质粒为标准模板，以样品总DNA为模板，以权利要求1所述的遗传标记物为靶序列，利用权利要求书2或3所述的引物和权利要求4或5所述探针进行实时荧光定量PCR，根据扩增曲线判定结果。

8.如权利要求7所述的鸡产蛋下降综合征病毒的检测方法，其特征在于，实时荧光定量PCR的20μl反应体系为：Premix Ex Taq2×buffer 12.5μL，10μmol/L上游引物EHFP和10μmol/L下游引物EHRP各0.4μL，10μM探针0.8μL，ROX染料0.4μL，模板(质粒DNA)2μL，补ddH₂O至20μL；所述实时荧光定量PCR的反应程序为：95℃预变性30s，1个循环；95℃变性5s，60℃退火30s，40个循环。

9.含有权利要求2或3所述引物和/或权利要求4或5所述探针的试剂盒。

10.权利要求2或3所述引物和/或权利要求4或5所述探针在制备检测鸡产蛋下降综合征病毒试剂盒或检测试剂中的应用。