[发明专利]一种用于霜霉病菌抗药性频率监测的方法

权利要求书

1.一种用于霜霉病菌抗药性频率监测的方法，其特征是，包括以下步骤：

A1、在待监测区域用五点法采集霜霉病病样，带回室内将病叶上的杂质和老熟的孢子囊用无菌水洗脱，在19℃下黑暗培养诱导产生新的孢子囊；

A2、将所有采集病叶上的新生孢子囊洗脱并混合制成孢子囊悬浮液，浓度为：1.0×10⁴-1.0×10⁵个孢子囊/mL；

A3、分别将孢子囊悬浮液用液滴法接种健康离体植物叶片制成的叶碟背面，叶碟事先用无菌水浸泡30分钟和2×(待侧杀菌剂最小抑制浓度)药液浸泡30分钟；

A4、将接种叶蝶置于吸水纸保湿的培养皿中，先于19℃黑暗条件下保湿培养12h，再于19℃、12h光暗交替条件下保湿培养5-7d，然后测量叶碟上的发病面积；

A5、根据杀菌剂处理叶碟上霜霉病的发病面积与未用药剂处理叶碟上霜霉病的发病面积的比率来测算抗药性菌株的频率。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是：田间采用五点法采集霜霉病病样，室内将老熟孢子囊和杂质洗脱后在19℃下黑暗培养诱导产生新的孢子囊，再将所有采集的病样孢子囊洗脱混合形成混合孢子囊悬浮液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征是：将混合孢子囊悬浮液接种叶蝶背面，每个叶蝶背面接种20μl孢子悬浮液，叶碟浸泡过程中无菌水和药液均含有0.02％的吐温20和0.1％的甲醇；浸泡过程中需经常搅动，以确保每个叶碟都被均匀的湿润。