[发明专利]褐牛蜘蛛腿综合征致病位点PCR检测方法有效
| 申请号： | 201210076915.1 | 申请日： | 2012-03-21 |
| 公开（公告）号： | CN102586464A | 公开（公告）日： | 2012-07-18 |
| 发明（设计）人： | 王雅春;初芹;焦士会;俞英;张胜利;孙东晓;张毅;张沅 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王朋飞;王加岭 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 蜘蛛 综合征 致病 pcr 检测 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种褐牛蜘蛛腿综合征致病位点PCR检测用引物，其核苷酸序列如下：
5’-CTCAAGAGTCACCACGCAGAT-3’，
5’-ATGGAGGGTGCCTTGTCGTC-3’。
2.如权利要求1所述引物，其特征在于，还包括与引物配合使用的荧光染料。
3.如权利要求1所述的引物，其特征在于，所述染料为FAM、HEX或TET。
4.含权利要求1～3任意一项所述引物的检测试剂盒。
5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，其还包括：DNA裂解液、阴性模板和/或阳性模板。
6.一种检测褐牛蜘蛛腿综合征致病位点方法，其特征在于，其具体包括以下步骤：
1)目的基因的扩增
以褐牛组织细胞DNA为模板，利用权利要求1所述引物进行PCR扩增，回收PCR扩增产物；
2)基因分型：对上述PCR扩增产物直接测序或者利用荧光毛细管电泳或者荧光聚丙烯酰胺凝胶电泳分型。
7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增条件为95℃预变性5min，然后95℃变性30s、63℃退火30s、72℃延伸30s，共35个循环，72℃最终延伸10min。
8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述引物用量为1.5μL，引物的终浓度为10μM。
9.权利要求6～8任意一项所述方法在牛抗病育种中的应用。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述牛为褐牛。
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