[发明专利]一种直接从土壤或其他基质中快速检测鉴定香蕉穿孔线虫的方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学检测鉴定技术领域，具体涉及一种直接从土壤或其他基质中快速检测鉴定香蕉穿孔线虫的方法。

背景技术

香蕉穿孔线虫（Radopholus similis (Cobb) Thorne,1949）是一种迁移性植物内寄生线虫，已报道的寄主植物超过250种（O’Bannon,1977），严重为害香蕉（Musa spp.）、柑橘（Citrus spp.）、胡椒（Piper nigrum）、生姜（Zingier officinale）等多种经济植物和观赏植物（Luc et al，1990；Richardson et al，1993；Uchida et al，2003；Sundararaju et al，1979），香蕉穿孔线虫广泛分布于热带和亚热带的大部分香蕉产区和温带地区的温室中，已报道有该线虫分布的国家和地区超过90个（谢辉，2006），是诸多国家的重要检疫危险性植物有害生物（Cotton J et al；OEPP/EPPO，2008），也是中国禁止进境植物检疫性有害生物（中华人民共和国农业部，2007）。香蕉穿孔线虫最早是由美国线虫学家Cobb在1891年从采自斐济的香蕉（Musa sp.）根部发现的，从19世纪开始随着香蕉球茎和蕉苗等种植材料在香蕉种植国家和地区间传播，20世纪60年代该线虫随着观赏植物传播到法国、比利时等欧洲国家的温室中，到20世纪末世界上大多数香蕉种植区都有该线虫分布（Gowen et al，1990；Loof，1991；Willams et al，1973；Marin et al，1998）。中国台湾在1971年从美国夏威夷引进的火鹤花上发现香蕉穿孔线虫（罗宗爵等，1973）；中国内地口岸，从20世纪80年代开始多次从进境香蕉苗和观赏植物上截获香蕉穿孔线虫（林奇力，1986；宋绍等，1999；陈勇等，2002；钟国强等，1999；孙国坤，2004；张绍生等，2003；李一农等，2004；赵立荣等，2004；钟国强等，2005；钟国强等，2004；黄发余等，2001a；黄发余等，2001b；黄发余等，2002；蒋寒等，2004）。可见，随着经济及农业生产和农产品贸易迅速发展，植物种苗等种植材料在国家和地区间调运的数量不断增加，而其中很多植物是香蕉穿孔线虫的寄主，从而促使了香蕉穿孔线虫在世界广泛的传播。由于香蕉穿孔线虫对作物为害所造成的损失非常大，要有效阻止香蕉穿孔线虫在国家和地区间的传播和扩散，需要加强对引进和调运的香蕉穿孔线虫寄主植物及其携带土壤或基质进行检测，并准确快速的检测鉴定可能携带的香蕉穿孔线虫。

香蕉苗和观赏植物是目前携带传播香蕉穿孔线虫风险最大的寄主植物，因此加强对可能携带该线虫的植物种植材料及其粘附的土壤或其他栽培基质的检测至关重要。但常规检测方法要首先对可疑植物携带的土壤或者基质进行分离，在体视显微镜下对分离到的线虫进行形态观察，然后挑出疑似香蕉穿孔线虫，再进行具体的形态学鉴定或者进行分子检测鉴定。这种检测鉴定方法需要的时间相对较长，并且操作人员需具备专门的植物线虫鉴定技能和经验才能在体视显微镜下检测鉴定并挑出疑似香蕉穿孔线虫。本课题组已成功建立了从植物组织中直接检测鉴定香蕉穿孔线虫的分子生物学技术（刘一帆等. 从混合线虫样品和植物组织中直接检测香蕉穿孔线虫的ITS-PCR方法. 中国农业科学，2011, 44(19): 3991-3998），而运用分子生学方法直接检测鉴定土壤或基质中香蕉穿孔线虫的技术尚未有报道。