[发明专利]一种检测诺沃克病毒核苷酸的引物、探针及方法

权利要求书

1.一种检测诺沃克病毒核苷酸的引物，其特征在于，其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1，SEQ ID No.2所示。

2.一种检测诺沃克病毒核苷酸的探针，其特征在于，其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.3所示；该探针的5’端标记有报告荧光染料，3’端标记有淬灭荧光染料。

3.根据权利要求2所述一种检测诺沃克病毒核苷酸的探针，其特征在于，所述报告荧光染料为FAM、HEX、TET、JOE、VIC、FITC、CY3或CY5，所述淬灭荧光染料为TAMRA、ROX、DABCY1、BHQ 1或BHQ2。

4.一种检测诺沃克病毒核苷酸的方法，其特征在于，该方法以样品RNA为模板，利用权利要求1所述的引物以及权利要求2所述的探针进行实时荧光RT-PCR扩增，每个循环结束采集数据，反应结束后，若出现诺沃克病毒特异性荧光扩增曲线则判定样品RNA中含有诺沃克病毒核苷酸。

5.根据权利要求4所述一种检测诺沃克病毒核苷酸的方法，其特征在于，所述实时荧光RT-PCR扩增的反应体系如下：2.5μL 10×One Step RNA PCR Buffer，终浓度为0.4mM的dNTP，终浓度为400μM的引物，终浓度为200μM的探针，终浓度为2.5U的Taq酶，终浓度为20U的RNase Inhibitor，终浓度为2.5U的AMV RTase XL，5μL样品RNA，10.5μL RNase Free dH₂O。

6.根据权利要求4所述一种检测诺沃克病毒核苷酸的方法，其特征在于，所述实时荧光RT-PCR扩增的反应条件如下：50℃反转录20min；95℃变性3min；以95℃5s，60℃40s扩增45个循环。