[发明专利]适用于三个转基因大豆品系特异性检测的标准质粒分子

说明书

技术领域

本发明涉及一种适用于三个转基因大豆品系特异性检测的标准质粒分子，属于生物技术领域。

背景技术

基因工程技术的出现和应用为农业、医学等领域开辟了一个全新的发展时代。转基因产品越来越进入人们的生活，据国际农业生物技术应用署(ISAAA)的最新资料表明，自1996年到2010年，全球的转基因作物种植总面积增加了87倍，达到了1.48亿公顷。目前，世界各国进行田间试验的转基因作物超过5000种，批准商品化的转基因作物有160多种，包括玉米、大豆、油菜、棉花、番茄、马铃薯、甜椒、西葫芦、木瓜等，其中转基因大豆种植面积居第二位，达到了9000万英亩。随着遗传改良作物的广泛种植，转基因作物的生态风险,可能带来的环境问题、转基因产品作为食品、饲料对人类及动物的可能带来健康问题、国际贸易问题、知识产权问题等已引起世界性的广泛关注,国际组织和国家纷纷制定相应的安全管理法规，加强遗传改良作物的规范管理，并对遗传改良作物及其产品实施标识制度。我国于2001年5月9日公布并实施《农业转基因生物安全管理条例》，并在2002年1月5日公布了农业转基因生物安全评价、标示和进口安全管理三个配套管理办法。

为了应对遗传改良作物管理相关的法律法规和制度，建立高效、快速、特异的检测技术十分必要，它是各国际组织和国家管理遗传改良作物的有力技术支撑。目前已经发展并广泛应用的转基因产品检测方法有两类：一类是基于核酸水平的检测，另一类是基于蛋白质水平的免疫学检测。基于核酸的聚合酶链反应（PCR）检测技术因具有高灵敏度和特异性强的优点，已成为目前最重要、应用最广泛的遗传改良作物及其产品检测技术。目前基于核酸的检测技术中，最常用的检测方法之一是定性PCR技术。通过对样品中可能含有的外源基因进行扩增，再利用琼脂糖电泳进行鉴定，如果电泳结果含有特异的条带，说明样品中含有转基因成分；反之则没有。转基因PCR检测方法建立时，应设置阴性对照、阳性对照和空白对照，以确保检测过程的有效和检测结果的可靠性。阳性对照是指由阳性标准物质即特定的转基因作物中提取的DNA作为PCR反应体系的模板得到的结果。由于转基因作物存在生物安全性的问题，所以有些转基因作物的阳性样品很难获得。目前，用于转基因检测的阳性标准物质主要是用纯合的转基因植物材料配置的，位于比利时的欧盟联合研究中心下属的标准物质与测量研究所(Institute for Reference Materials and Measurements，IRMM)专业配制和提供用于转基因定量PCR检测的阳性标准品。到目前为止在市场上销售打的遗传改良作物的标准物质仅有十几种。但这类来源于农产品的标准物质，其必须有专门的研究机构来制备，贮存和测定过程受很多因素影响，很难维持恒定的量，而且，这些标准物质的转基因含量范围一般是从0.1%到5%，而实际检测的样品中的转基因含量可能会超出这个范围。标准物质的缺乏已成为检测方法建立和应用的瓶颈，阻碍了转基因产品标识制度的顺利实施。

为了解决这个问题，国内外科研机构做了大量的研究工作。目前，以质粒作为阳性标准物质在国际转基因检测中得到了公认。质粒分子的优点主要是可以通过微生物进行大量培养，纯度较高；且操作容易，稳定性高，同一个标准分子可以同时包含多个外源目的基因和内标准基因，经济高效。近年来，越来越受到各国转基因检测专家和学者们的重视，并逐渐取代传统阳性标准品用于转基因品系及其加工产品的PCR检测。

目前全世界有10多个转基因大豆品系进入商品化种植，其中包括孟山都公司开发的GTS40-3-2，先锋公司开发的DP-356043和DP-305423。我国虽然不种植转基因大豆，但每年都进口几千万吨转基因大豆用于食品或饲料的加工原料。迄今为止，还没有同时适用于以上三种转基因大豆检测的标准质粒分子的报道。为了给中国转基因大豆品系监管提供必要的技术支撑，有必要开发适用于以上三种转基因大豆品系特异性检测的、稳定可靠的通用型标准质粒分子。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种适用于三个转基因大豆品系特异性检测的标准质粒分子；本发明的目的在于提供可同时适用于转基因大豆品系DP-356043、DP-305423、GTS40-3-2品系特异性检测的通用标准质粒分子、其构建方法及应用。

本发明所提供的标准质粒分子，其包含以下序列片段： DP-356043品系特异性片段、 DP-305423品系特异性片段、GTS40-3-2品系特异性序列和大豆内源标准基因Lectin的特异序列片段。