[发明专利]检测Ⅱ类细菌素产生菌是否存在群体感应系统的方法

权利要求书

1.用于鉴定或辅助鉴定待测II类细菌素产生菌是否存在群体感应系统相关基因的PCR引物组，由9个引物对组成，第一个引物对是由序列表中的序列1和序列2所示的两条单链DNA组成的特异于自诱导肽基因的引物对1；第二个引物对是由序列表中的序列3和序列4所示的两条单链DNA组成的特异于自诱导肽基因的引物对2；第三个引物对是由序列表中的序列5和序列6所示的两条单链DNA组成的特异于组氨酸蛋白激酶基因的引物对3；第四个引物对是由序列表中的序列7和序列8所示的两条单链DNA组成为特异于组氨酸蛋白激酶基因的引物对4；第五个引物对是由序列表中的序列9和序列10所示的两条单链DNA组成的特异于组氨酸蛋白激酶的引物对5；第六个引物对是由序列表中的序列11和序列12所示的两条单链DNA组成的特异于感应调节蛋白基因的引物对6；第七个引物对是由序列表中的序列13和序列14所示的两条单链DNA组成的特异于感应调节蛋白基因的引物对7；第八个引物对是由序列表中的序列15和序列16所示的两条单链DNA组成的特异于感应调节蛋白基因的引物对8；第九个引物对是由序列表中的序列17和序列18所示的两条单链DNA组成的特异于组氨酸蛋白激酶基因和感应调节蛋白基因的引物对9。

2.含有权利要求1所述的PCR引物组的试剂盒。

3.权利要求1所述PCR引物组的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括将权利要求1所述PCR引物组中各引物对的所述两条单链DNA分别单独包装的步骤。

4.权利要求2所述PCR试剂盒的制备方法，包括如下步骤：将权利要求1所述PCR引物组中各引物对的所述两条单链DNA分别单独包装后，与下述物质包装在同一试剂盒内：PCR反应缓冲液、DNA聚合酶、4种dNTP和ddH₂O。

5.权利要求1所述的PCR引物组在制备用于鉴定或辅助鉴定待测II类细菌素产生菌是否含有群体感应系统相关基因的试剂盒中的应用，所述群体感应系统相关基因为自诱导肽基因、组氨酸蛋白激酶基因和感应调节蛋白基因。

6.鉴定或辅助鉴定待测II类细菌素产生菌是否含有群体感应系统相关基因的方法，所述群体感应系统相关基因为自诱导肽基因、组氨酸蛋白激酶基因和感应调节蛋白基因，其特征在于：所述方法包括下述(1)和(2)的步骤：

所述(1)为如下A)-I)：

A)以待测II类细菌素产生菌的基因组DNA为模板，用权利要求1中所述引物对1进行PCR反应；

B)以待测II类细菌素产生菌的基因组DNA为模板，用权利要求1中所述引物对2进行PCR反应；

C)以待测II类细菌素产生菌的基因组DNA为模板，用权利要求1中所述引物对3进行PCR反应；

D)以待测II类细菌素产生菌的基因组DNA为模板，用权利要求1中所述引物对4进行PCR反应；

E)以待测II类细菌素产生菌的基因组DNA为模板，用权利要求1中所述引物对5进行PCR反应；

F)以待测II类细菌素产生菌的基因组DNA为模板，用权利要求1中所述引物对6进行PCR反应；

G)以待测II类细菌素产生菌的基因组DNA为模板，用权利要求1中所述引物对7进行PCR反应；

H)以待测II类细菌素产生菌的基因组DNA为模板，用权利要求2中所述引物对8进行PCR反应；

I)以待测II类细菌素产生菌的基因组DNA为模板，用权利要求2中所述引物对9进行PCR反应；

(2)检测步骤(1)得到的PCR产物的大小，按照如下方法根据PCR产物确定所述待测II类细菌素产生菌是否含有所述群体感应系统相关基因：

若引物对1的PCR产物含有450bp的DNA片段，和/或引物对2的PCR产物含有114bp的DNA片段，则所述待测II类细菌素产生菌含有自诱导肽基因或候选含有自诱导肽基因；若引物对1的PCR产物不含有450bp的DNA片段，同时引物对2的PCR产物也不含有114bp的DNA片段，则所述待测II类细菌素产生菌不含有自诱导肽基因或候选不含有自诱导肽基因；若引物对3的PCR产物含有165bp的DNA片段，和/或引物对4的PCR产物含有758bp的DNA片段，和/或引物对5的PCR产物含有927bp的DNA片段，和/或引物对9的PCR产物含有1727bp的DNA片段，则所述待测II类细菌素产生菌含有组氨酸蛋白激酶基因或候选含有组氨酸蛋白激酶基因；若引物对3的PCR产物不含有165bp的DNA片段，同时引物对4的PCR产物不含有758bp的DNA片段，同时引物对5的PCR产物不含有927bp的DNA片段，同时引物对9的PCR产物不含有1727bp的DNA片段，则所述待测II类细菌素产生菌不含有组氨酸蛋白激酶基因或候选不含有组氨酸蛋白激酶基因；若引物对6的PCR产物含有108bp的DNA片段，和/或引物对7的PCR产物含有414bp的DNA片段，和/或引物对8的PCR产物含有1249bp的DNA片段，和/或引物对9的PCR产物含有1727bp的DNA片段，则所述待测II类细菌素产生菌含有感应调节蛋白基因或候选含有感应调节蛋白基因；若引物对6的PCR产物不含有108bp的DNA片段，同时引物对7的PCR产物不含有414bp的DNA片段，同时引物对8的PCR产物不含有1249bp的DNA片段，同时引物对9的PCR产物不含有1727bp的DNA片段，则所述待测II类细菌素产生菌不含有感应调节蛋白基因或候选不含有感应调节蛋白基因。