[发明专利]一种原位检测线粒体DNA片段整合到核基因组中的方法

权利要求书

1.一种原位检测线粒体DNA整合到核基因组中的方法，其特征在于，包括如下步骤：

获得组织切片，经预处理后获得第一切片；

设计长度为50～70bp的探针并用荧光素标记；所述探针序列与所述线粒体DNA序列互补；

取无关DNA与所述第一切片混合后获得第二切片；

取所述探针与所述第二切片混合，杂交、复染，荧光显微检测；所述无关DNA与所述线粒体DNA不结合。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述线粒体DNA为小鼠线粒体DNA，所述探针序列如SEQ ID NO：1所示。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述线粒体DNA为大鼠线粒体DNA，所述探针序列如SEQ ID NO：3所示。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述无关DNA序列如SEQID NO：2所示。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述杂交为在65～85℃杂交5min，置于40～45℃杂交10～14h。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述荧光素包括异硫氰酸荧光素、四甲基异硫氰酸罗丹明、四乙基罗丹明、量子点、Cy3、Cy5中的一种或两者以上的混合物。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述预处理包括除蛋白、除RNA的步骤。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述预处理具体为采用终浓度为100～300μg/ml的蛋白酶K，35～40℃下孵育15～45min，采用终浓度为50～200μg/ml的RNAse，37℃下孵育15min。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述预处理还包括取采用终浓度为0.2mol/L的NaCl溶液，60℃处理1h。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述预处理还包括在15～35℃下于2×SSC溶液中漂洗2次，每次5min；甲醛固定10min；依次置于 70％乙醇、85％乙醇和100％乙醇各2min，自然干燥的步骤。