[发明专利]用于检测自身抗体的组合物和方法

说明书

发明领域

本发明提供了用于检测甲状腺激素封闭免疫球蛋白（TBI）的组合物和方法。本发明的方法对于TBI是灵敏和特异性的，并且可以用于TBI和甲状腺刺激免疫球蛋白（TSI）的双重检测。本发明的组合物和方法用于诊断与TBI和/或TSI的存在相关的疾病，用于监控疾病进展和/或治疗方案、治疗剂、疫苗等，并且用于帮助临床医生作出治疗决定。

发明背景

相当数量的群体患有甲状腺疾病，包括格雷夫斯氏病、桥本氏甲状腺炎、甲状腺功能亢进、甲状腺功能减退（包括新生儿甲状腺功能减退）、非甲状腺肿甲状腺功能减退、甲状腺机能正常或甲状腺机能减退自身免疫性甲状腺炎、原发性粘液性水肿和特发性粘液性水肿。这些疾病涉及自身抗体（甲状腺封闭免疫球蛋白（TBI）和/或甲状腺刺激免疫球蛋白（TSI））的作用，所述自身抗体识别且结合甲状腺上存在的受体，导致甲状腺激素生长中不希望有的变化。

虽然关于这些疾病中的一些的诊断技术是可获得的，但这些技术是繁琐费力的且缺乏足够的灵敏度和/或特异性。

因此，仍存在对用于检测甲状腺激素封闭免疫球蛋白（TBI）和/或甲状腺刺激免疫球蛋白（TSI）的组合物和方法的需要，所述组合物和方法是灵敏和特异性的，并且可以用于TBI和TSI的双重检测。

发明概述

本发明提供了用于检测测试样品中的甲状腺激素封闭免疫球蛋白（TBI）的方法，其包括a）提供i）由包含下述的一种或多种表达载体稳定转染的转基因细胞：1）与cAMP诱导型启动子可操作地连接的报道基因，和2）与组成型启动子可操作地连接的嵌合TSH受体（TSHR）基因，其中所述细胞在细胞膜上表达嵌合TSHR，ii）促甲状腺激素（TSH），iii）对照样品，和iv）测试样品；b）使转基因细胞和TSH与下述接触：i）对照样品，以产生第一种样品，和ii）测试样品，以产生第二种样品，其中所述接触在用于TSH与嵌合TSHR结合的条件下；和c）测量第一种样品中和第二种样品中的报道基因的表达水平，其中与第一种样品相比较，在第二种样品中的报道基因的表达水平减少指示测试样品中TBI的存在。在一个实施方案中，检测TBI的方法具有是在下述方法中检测TBI时的TBI IC₅₀的5倍到15倍小的TBI IC₅₀，所述方法包括用表达野生型TSHR的细胞代替表达嵌合TSHR的转基因细胞。在另一个实施方案中，检测TBI的方法具有是在下述方法中检测TBI时的TBI IC₅₀的10倍到30倍小的TBIIC₅₀，所述方法包括用抗TBI单克隆抗体检测TBI的特异性结合。在进一步的实施方案中，该方法进一步包括与第一种样品相比较，检测在第二种样品中的报道基因的表达水平减少。在另外一个实施方案中，该方法进一步包括通过比较下述来测定测试样品中的TBI水平：a）在与测试样品接触后的报道基因的表达水平，与b）在使转基因细胞与一种或多种标准样品接触后的报道基因的表达水平，所述标准样品各自含有已知浓度的TSH。在进一步的实施方案中，该方法是TBI特异性的。在另一个实施方案中，TSH具有小于100mIU/ml的浓度。在备选实施方案中，报道基因的表达包含生物发光蛋白质的表达。在进一步的实施方案中，生物发光蛋白质包含海肾萤光素酶氨基酸序列SEQ ID NO:03。在另一个实施方案中，转基因细胞包含选自CHO-MC4细胞和RD-MC4细胞的细胞。在一些实施方案中，将TSH替换为甲状腺刺激单克隆抗体和/或甲状腺刺激多克隆抗体。