[发明专利]化合物和核酸复合分子与核酸复合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种化合物、一种核酸复合分子和一种核酸复合物，该化合物、核酸复合分子和核酸复合物的制备方法，以及该化合物、核酸复合分子和核酸复合物在制备小干扰核酸药物中应用。

背景技术

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是由双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)分子在mRNA水平关闭相应基因的表达或使该基因沉默的过程。RNA干扰技术又被形象地称为基因敲低(knock-down)或基因沉默(gene silencing)，是一种典型的转录后基因调控方法，又称转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing，PTGS)。其最早是由Fire和Mello在Caenorhabditis elegans中阐明的(A.Fire，S.Xu，M.K.Montgomery，S.A.Kostas，S.E.Driver，C.C.Mello，Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans，Nature.391(1998)806-811.)两位因此重要发现于2006年被授予诺贝尔奖。这一系列的siRNA具有极好的药物前景。人类疾病可能通过RNA干扰技术，来靶向和抑制表达的致病基因的表达，从而达到药物的效果。

但由于结构的限制，siRNA成为药物还需要克服：稳定性，定向给药，脱靶效应，应激反应免疫反应等难题。其中siRNA的给药(delivery)问题是最大难点，也是目前的研究热点。RNA的化学结构决定了天然siRNA在穿透细胞膜和定向给药方面具有缺陷，研究者们利用多种修饰的方法对此进行了改善：1)通过小分子和多肽等的共轭结合(Muratovska，A.& Eccles，M.R.Conjugate for efficient delivery of short interfering RNA(siRNA)into mammalian cells.FEBS Lett.558，63-68(2004).；Oishi，M.，Nagasaki，Y.，Itaka，K.，Nishiyama，N.& Kataoka，K.Lactosylated poly(ethylene glycol)-siRNA conjugate through acid-labile β-thiopropionate linkage to construct pH-sensitive polyion complex micelles achieving enhanced gene silencing in hepatoma cells.J.Am.Chem.Soc.127，1624-1625(2005).；Soutschek，J.et al.Therapeutic silencing of an endogenous gene by systemic administration of modified siRNAs.Nature 432，173-178(2004).)；2)利用各种表面正电性的纳米颗粒辅助携带siRNA穿透细胞膜后释放(Torchilin，V.P.et al.Cell transfection in vitro and in vivo with nontoxic TAT peptide-liposome-DNA complexes.Proc.Natl Acad.Sci.USA 100，1972-1977(2003).；Auguste，D.T.et al.Triggered release of siRNA from poly(ethylene glycol)-protected，pH-dependent liposomes.J.Control.Release 130，266-274(2008).；Martina，M.-S.et al.The in vitro kinetics of the interactions between PEG-ylated magnetic-fluid-loaded liposomes and macrophages.Biomaterials 28，4143-4153(2007).)；3)脂质体或类脂质体的两性分子将siRNA进行包裹形成稳定颗粒辅助进行给药，如SNALP等(Felgner，P.L.et al.Lipofection：a highly efficient，lipid-mediated DNA-transfection procedure.Proc.Natl Acad.Sci.USA 84，7413-7417(1987).；Malone，R.W.，Felgner，P.L.& Verma，I.M.Cationic liposome-mediated RNA transfection.Proc.Natl Acad.Sci.USA 86，6077-6081(1989).；Li，W.&Szoka，F.Lipid-based nanoparticles for nucleic acid delivery.Pharm.Res.24，438-449(2007).)