[发明专利]食品中鲨鱼成分的实时荧光PCR检测方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和核酸检测技术领域。具体地，本发明涉及食品中鲨鱼成分的实时荧光PCR检测方法和试剂盒。

背景技术

鲨鱼指软骨鱼纲板鳃亚纲鲨鱼总目的鱼类。鲨鱼不但在维持海洋生态平衡方面起着重要作用，而且是对人类十分有益的经济鱼类。鲨鱼鳍加工制成的鱼翅是价值较高的海产品之一，研究报道其富含胶原蛋白，有预防骨骼老化，防癌抗癌，滋补养颜、延年益寿等功效。鲨鱼软骨中提取的鲨鱼硫酸软骨素不仅能降低血脂，防治冠心病和心肌梗塞等心血管疾病，而且还常用作保护关节的膳食补充剂。鲨鱼肝中提炼的鲨鱼肝油富含多种维生素和多不饱和脂肪酸，是最理想的保健营养品。然而，一些不法商贩为追求巨大的经济利益，将不含真鱼翅成分的假鱼翅标成真鱼翅出售，将其他动物成分加工成的硫酸软骨素标注成鲨鱼硫酸软骨素混入市场，极大地扰乱了市场秩序，侵害了消费者的合法权益，影响了国际贸易。为保证进出口产品质量和进出口贸易的顺畅流通，必须建立鲨鱼类产品中鲨鱼源性成分的真实性鉴别方法。

国外对鲨鱼类产品的研究主要集中在鱼翅的鲨鱼种属来源鉴定、鱼翅贸易引起的世界范围内鲨鱼种类和数量的变化、世界范围内鱼翅贸易的监控和管理方以及鲨鱼硫酸软骨素和鲨鱼肝油的生理保健功能和疗效等。国内对鲨鱼产品的研究主要有鱼翅营养成分的提取和定量分析、鱼翅的加工工艺和仿鱼翅的研制以及鲨鱼硫酸软骨素的提取优化和含量测定。

目前，国内外对食品中鲨鱼源性成分真实性的鉴定方法研究都还很少，因此迫切需要开发有效的鉴定方法，以规范市场，保护消费者权益。

发明内容

本发明的目的在于提供食品中鲨鱼成分的实时荧光PCR检测方法和试剂盒。

在本发明的第一方面，提供一种鉴定鲨鱼成分的方法，所述方法包括：

以待测样品的DNA为模板，以SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的引物进行PCR扩增；若发生特异性扩增，则表明待测样品中包含鲨鱼成分。

在一个优选例中，所述的选自(但不限于)：狗鲨；加勒比斜锯牙鲨；鼠鲨；大青鲨；澳洲半沙条鲨；路氏双髻鲨；尖吻斜锯牙鲨；尖吻鲭鲨；舒氏星鲨。

在另一优选例中，所述的PCR是SYBR Green实时荧光PCR。

在另一优选例中，所述的待测样品是食品。

在另一优选例中，所述方法的检测灵敏度为10^-4ng/μL DNA。

在本发明的另一方面，提供一种引物，所述引物是引物对，其序列如SEQID NO：1和SEQ ID NO：2所示。

在本发明的另一方面，提供所述的引物的用途，用于从待测样品中鉴定鲨鱼成分。

在本发明的另一方面，提供一种鉴定鲨鱼成分的试剂盒，其中包括所述的引物。

在另一优选例中，所述试剂盒中还包括：含有鲨鱼成分的检测标准品(如鲨鱼阳性对照质粒)。

在另一优选例中，所述试剂盒中还包括选自以下的试剂：DNA提取试剂(或试剂盒)，PCR缓冲液，DNA聚合酶，SYBY Green Pre Mix。

在另一优选例中，所述的试剂盒中还包括：说明鉴定鲨鱼成分的方法的使用说明书。

本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

附图说明

图1、鲨鱼DNA的SYBR Green实时荧光PCR(SG-PCR)扩增曲线。

图中曲线按箭头处从左到右依次为：1：鲨鱼阳性对照质粒；2：狗鲨；3：加勒比斜锯牙鲨；4：鼠鲨；5：大青鲨；6：澳洲半沙条鲨；7：路氏双髻鲨；8：尖吻斜锯牙鲨；9：尖吻鲭鲨；10：舒氏星鲨。

图2、鲨鱼DNA的SG-PCR溶解曲线。

箭头所指曲线为鲨鱼阳性对照质粒的PCR溶解曲线。该图纵坐标为荧光增量，式子：-d(RFU)/dT。

图3、48种非鲨鱼动植物的SG-PCR扩增结果。

箭头所指曲线为鲨鱼阳性对照质粒的PCR扩增结果。

图4、48种非鲨鱼动植物的SG-PCR溶解曲线。

箭头所指曲线为鲨鱼阳性对照质粒的PCR溶解曲线。该图纵坐标为荧光增量，式子：-d(RFU)/dT。

图5、狗鲨DNA检测灵敏度扩增曲线。

扩增曲线从左到右依次为：1：10ng/μL；2：1ng/μL；3：10^-1ng/μL；4：10^-2ng/μL；5：10^-3ng/μL；6：10^-4ng/μL。