[发明专利]荧光PCR毛细管电泳检测FLT3-ITD基因突变的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及检测FLT3(Fms-like tyrosine kinase 3)基因近膜区的序列内部串联重复(internal tandem duplications，ITD)突变的试剂盒，特别是涉及以荧光PCR毛细管电泳技术检测临床样品中FLT3-ITD的试剂盒。由于本试剂盒对全血或骨髓样品中的FLT3-ITD的检测和分析具有很高的灵敏度和特异性，可广泛应用于白血病判断预后，指导治疗和预测疾病复发等多个领域。

背景技术

FLT3(Fms-like tyrosine kinase 3)是III型受体酪氨酸激酶家族中的一员，其突变与白血病的发生密切相关。FLT3与其配体(FL)在造血干/祖细胞的增殖和分化中起重要的调节作用。FL与FLT3的细胞外结构域结合介导一系列细胞内信号传导途径，调节细胞增殖和活化。当FLT3发生基因突变时，可导致FLT3非配体依赖性磷酸化，破坏正常血细胞的增殖、分化与凋亡。FLT3突变有两种形式：一种为发生在FLT3基因近膜区的序列内部串联重复(internal tandem duplications，ITD)，称为FLT3-ITD突变，ITD的大小和位置都存在多态性，典型的ITD位于第14外显子，也可累及第14内含子和第15外显子；一种为发生在酪氨酸激酶结构区域的点突变，称为FLT3-TKD突变。目前有关于FLT3-ITD突变的研究表明FLT3-ITD突变最常出现在急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia，AML)患者中，突变发生率为15％～35％，其次为骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes，MDS)，突变发生率约为2％～5％。FLT3-ITD在急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中发生率极低(低于1％)，而在慢性髓性白血病(CML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、多发性骨髓瘤、成人体细胞白血病中尚未发现FLT3-ITD突变。

AML是一组起源于造血干细胞的恶性血液病，具有高度异质性。在影响AML预后危险度的众多因素中，细胞遗传学已被认为是最重要的独立预后因素，一些特异性染色体核型异常，不仅成为AML诊断中的重要标志物，并常被认为是判断预后的标志。但是大约40％～50％的AML患者未检测到染色体核型异常，这些患者预后变异较大，5年生存率24％～42％。所以寻找核型正常AML患者的预后分子标志成为人们关注的焦点。随着分子遗传学检测方法的应用，学者们发现正常核型的AML患者在分子学水平上是存在异质性的，包括基因突变或某些特定基因的表达异常，为AML患者的进一步预后分级及分子靶向治疗提供了依据FLT3基因突变是已发现的影响AML患者预后的分子标志之一，可作为AML患者预后不良的独立指标。FLT3-ITD突变是AML患者中最常见的一种突变类型，约15％～35％AML病例存在FLT3-ITD突变，另外还有约7％的AML病例存在FLT3-TKD突变。但是目前大部分研究认为FLT3-TKD突变与AML预后无关，而FLT3-ITD突变与AML发病和发展密切相关，是一个重要的独立预后因素。FLT3-ITD阳性患者具有较独特的临床特征，目前针对于此突变的靶向治疗也已经进入不同的临床试验阶段。而且，不同ITD患者的预后也存在差别，这与ITD-AR(internal tandem allelic ratio，内部串联重复等位基因比例)值有关，即ITD：WT(FLT3野生型基因)比值，ITD-AR值增加可能导致预后不良，因此ITD-AR值也是AML患者的很强的独立预后因素。

MDS患者FLT3-ITD突变相比于没有突变的患者，FLT3-ITD阳性患者转为AML的概率有增高趋势，进展为AML的时间有缩短趋势，且总体生存期缩短，MDS转为AML后，FLT3-ITD阳性率增高，因此FLT3-ITD是MDS转化为AML的高危因素，为预后不良因素。

综上，FLT3-ITD可作为AML和MDS患者预后不良的独立指标，对FLT3-ITD基因突变进行检测可以帮助判断预后，用于指导治疗、判断疗效和疾病复发，对增加患者的长期生存率和生存质量有着非常重要的意义。