[发明专利]荧光PCR毛细管电泳检测FLT3-ITD基因突变的试剂盒

权利要求书

1.一种检测样品中FLT3-ITD的试剂盒，试剂盒包括：(1)PCR扩增反应液、阴性质控品、阳性质控品并加盖密封的多个试剂瓶或管，和(2)分隔并集中包装这些试剂瓶或管的包装盒，其中PCR扩增反应液包括5’端结合有荧光发生基团的正向引物、反向引物、dNTPs、耐热DNA聚合酶、PCR缓冲液和水，(3)以电泳法确定扩增片段的大小和基因剂量，其特征在于所使用的正反向引物的序列可以为：

5’-FAM-TCTCCTCTTCATTGTCGTTTTA-3’、5′-ATGGTGAGTACGTGCATTTTA-3′；

5’-FAM-TTCATTATTCTTTCCTCTATCTGC-3’、5′-TGTTGCGTTCATCACTTTTC-3′；

5’-FAM-AACTGCCTATTCCTAACTGACTC-3’、5’-TCCATAAGCTGTTGCGTTC-3’；

5’-FAM-GCCAGCTACAGATGGTACAGG-3’、5’-AGCATTTTGACGGCAACC-3’。

2.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于PCR缓冲液包含10mM Tris-HCl(pH8.0)、150mM KCl、3mM MgCl₂，每25微升的PCR缓冲液中加入2单位Taq酶。

3.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于PCR扩增反应体系由PCR缓冲液、耐热DNA聚合酶、dNTPs，引物所组成，其特征在于引物的序列组合为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2，或SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4，或SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6，或SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8。

4.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于阳性质控品为携带有FLT3-ITD序列的重组质粒，质粒由上下游引物扩增的PCR产物通过市售的载体克隆构建而成，所使用的上下游引物的序列组合可以是SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2，或SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4，或SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6，或SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8。

5.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于试剂盒的核酸扩增系统是采用聚合酶链反应，并且所说的扩增反应循环是重复30-50次的聚合酶链反应循环。

6.根据权利要求1的试剂盒，其特征还在于所检测样品为全血或骨髓等白血病临床样品。