[发明专利]疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药领域。具体地，本发明涉及疫苗及其制备方法。

背景技术

狂犬病是一种人畜共患的病毒性传染病，人一旦被病畜咬伤发病，病死率为100％，及时注射疫苗及预防接种是临床上可有效刺激机体产生抗狂犬病病毒抗体，防治狂犬病的唯一有效手段。目前各国广泛应用的疫苗有以下几种：人二倍体细胞狂犬病疫苗、鸡胚细胞狂犬病疫苗、Vero细胞狂犬病疫苗和地鼠肾细胞狂犬病疫苗。而目前我国自行生产的疫苗只有Vero细胞狂犬病疫苗和地鼠肾细胞狂犬病疫苗。鸡胚细胞狂犬病疫苗于1984年在德国研制成功，多年的临床研究结果表明该疫苗具有很高的免疫原性，仅产生轻微的局部和全身反应，且无抗鸡胚细胞蛋白质抗体。该疫苗于1997年通过了美国食品和药品监督管理局的认证，是唯一获得WHO资格预审证书的狂犬病疫苗，目前已在全球40多个国家注册，用来进行狂犬病暴露前和暴露后的预防接种。2003年该疫苗原装进口中国，由于价格原因，目前的市场份额非常有限。但它是国家食品药品监督管理局设定的最高质量标准，以及国内狂犬病疫苗研发的主要方向。

然而目前狂犬病疫苗的制备方法仍有待改进

发明内容

本发明是基于发明人的下列发现而完成的：目前国内制备人用狂犬病疫苗时采用的贴壁培养系统有转瓶和微载体。转瓶培养是目前国内疫苗生产厂家普遍采用的细胞培养方式，具有结构简单、投资少、技术成熟、容易扩大等优点，但同时也存在着细胞生长密度低、细胞容易脱落导致收获次数减少、转瓶间细胞生长差异大、劳动强度大、占用空间大、能耗高、水耗量大等缺点。而微载体培养细胞则需要在生物反应器内进行，具有细胞生长密度大、有害代谢产物浓度低、收获期长的优点，但该培养方式的缺点是前期投入大、对人员要求高、剪切力大、放大困难、验证复杂。而细胞工厂做为一种病毒疫苗的培养方式，同时具备了转瓶和生物反应器的部分优点，已用于多种病毒疫苗的培养，但应用于人用狂犬病疫苗未见报道。

为此，根据本发明的第一方面，本发明提出了一种制备疫苗的方法。根据本发明的实施例，该制备疫苗的方法包括以下步骤：从鸡胚提取成纤维细胞，以便获得鸡胚成纤维细胞悬浮液；将病毒在所述成纤维细胞悬浮液中进行培养，以便获得富集病毒的培养液；从所述培养液分离所述经过富集的病毒；对所述病毒进行灭活处理；以及对所述经过灭活的病毒进行纯化，以便获得所述疫苗。由此，根据本发明的方法，可以高效的制备疫苗。

根据本发明的实施例，上述制备疫苗的方法还可以具有下列附加技术特征：

根据本发明的一个实施例，所述疫苗为狂犬病疫苗，优选所述病毒为狂犬病Flury-LEP株病毒。由此，根据本发明的实施例的制备疫苗的方法，能够有效地用于生产狂犬病疫苗，降低狂犬病疫苗的生产成本。

根据本发明的一个实施例，所述鸡胚为选自无特定病原体鸡胚，优选所述鸡胚为7-9日龄。由此，可以进一步提高制备疫苗的方法的效率。

根据本发明的一个实施例，所述将病毒在所述成纤维细胞悬浮液中进行培养是在细胞工厂中进行的。由此，可以进一步提高制备疫苗的效率。根据本发明的具体示例，所述将病毒在所述成纤维细胞悬浮液中培养进一步包括以下步骤：将所述鸡胚成纤维细胞悬浮液在细胞工厂中在38摄氏度下培养24小时，再加入含有病毒的细胞维持液在33摄氏度下进行培养。优选所述含有病毒的细胞维持液中病毒的接种比例为1∶500，即500ml维持液接种1ml病毒。

根据本发明的另一具体示例，所述将病毒在所述成纤维细胞悬浮液中培养进一步包括以下步骤：在所述成纤维细胞悬浮液中加入病毒，以便获得含有病毒的成纤维细胞悬浮液；以及将所述含有病毒的成纤维细胞悬浮液在37摄氏度下培养48小时后，添加维持液并且在35摄氏度进行培养。优选所述含有病毒的细胞维持液中病毒的接种比例为1∶20，即20ml维持液接种1ml病毒。

根据本发明的实施例，所述细胞工厂为适于单层细胞培养的培养容器。由此，可以进一步提高制备疫苗的效率。

根据本发明的一个实施例，所述从所述培养液分离所述经过富集的病毒是通过超滤浓缩进行的。优选所述超滤浓缩是使用截留分子量为300KD的超滤膜进行的。由此，可以进一步提高制备疫苗的效率。

根据本发明的一个实施例，所述对所述病毒进行灭活处理是使用β-丙内酯进行的。由此，可以提高对病毒进行灭活的效率，从而可以进一步提高制备疫苗的效率。

根据本发明的一个实施例，所述对所述病毒进行灭活处理是使用1∶2000-4000的β-丙内酯进行的。由此，可以进一步提高对病毒进行灭活的效率，从而可以进一步提高制备疫苗的效率。