[发明专利]疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种制备疫苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：

从鸡胚提取成纤维细胞，以便获得鸡胚成纤维细胞悬浮液；

将病毒在所述成纤维细胞悬浮液中进行培养，以便获得富集病毒的培养液；

从所述培养液分离所述经过富集的病毒；

对所述病毒进行灭活处理；以及

对所述经过灭活的病毒进行纯化，以便获得所述疫苗，

其中，

优选所述疫苗为狂犬病疫苗，更优选所述病毒为狂犬病Flury-LEP株病毒，

优选所述鸡胚为选自无特定病原体鸡胚，更优选所述鸡胚为7-9日龄，

优选所述将病毒在所述成纤维细胞悬浮液中进行培养是在细胞工厂中进行的。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述将病毒在所述成纤维细胞悬浮液中培养进一步包括以下步骤：

将所述鸡胚成纤维细胞悬浮液在细胞工厂中在38摄氏度下培养24小时，再加入含有病毒的细胞维持液在33摄氏度下进行培养，优选所述细胞工厂为适于单层细胞培养的培养容器，

其中，

优选所述含有病毒的细胞维持液中病毒的接种比例为1∶500。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述将病毒在所述成纤维细胞悬浮液中培养进一步包括以下步骤：

在所述成纤维细胞悬浮液中加入病毒，以便获得含有病毒的成纤维细胞悬浮液；以及

将所述含有病毒的成纤维细胞悬浮液在37摄氏度下培养48小时后，添加维持液并且在35摄氏度进行培养，

其中，优选所述细胞工厂为适于单层细胞培养的培养容器。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述从所述培养液分离所述经过富集的病毒是通过超滤浓缩进行的，

其中，优选所述超滤浓缩是使用截留分子量为300KD的超滤膜进行的。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对所述病毒进行灭活处理是使用β-丙内酯进行的，优选使用1∶2000-4000的β-丙内酯进行的。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在使用β-丙内酯灭活病毒后，进一步包括将经过灭活的病毒置于37摄氏度的水浴中，以便降解所述β-丙内酯。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，使用凝胶层析对所述经过灭活的病毒进行纯化，优选使用Sepharose 4FF凝胶层析进行所述纯化。

8.一种疫苗，其特征在于，所述疫苗是通过权利要求1-17任一项所述的方法制备的。

9.根据权利要求8所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗包含：

至少4.0IU的狂犬病Flurrry-LEP株病毒；

10mg人血白蛋白；

10mg明胶；

50mg蔗糖；

0.135mg磷酸二氢钾；

0.809mg磷酸二氢钠；以及

8.5mg氯化钠。

10.根据权利要求9所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗呈冻干状态。