[发明专利]一种抑制芸苔根肿菌的解淀粉芽胞杆菌及其活性物质的分离与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株解淀粉芽胞杆菌，解淀粉芽胞杆菌的培养方法及从其分离对芸苔根肿菌具有抑菌作用的活性物质的方法，活性物质的用途，与微生物农药技术领域有关。 

背景技术

芽胞杆菌是自然界中广泛存在的一种非致病性细菌，能产生多种抗菌物质，其中大部分是多肽，主要抑制革兰氏阳性菌；有些还能抑制革兰氏阴性菌、霉菌和酵母(刘静等，枯草芽孢杆菌J A抗菌物特性的研究及抗菌肽的分离纯化，微生物学报，2004，44(4)：511-513)。它们易于繁殖，适应环境能力强，具有很大的开发利用价值。解淀粉芽胞杆菌能产生多种抑制植物病原真菌的抗菌物质，因而在生物防治中起着重要的作用(Chen XH et al.，Comparative analysis of the completegenome sequence of the plant growth-promoting bacterium Bacillusamyloliquefaciens FZB42，2007，Nat Biotechnol，25：1007-1014)。这些抗菌物质主要分为两大类，一类是低分子量抗菌肽，包括环状肽或环状脂肽，也有些为线状肽，另有少量为蛋白类抑菌物质，这一类占解淀粉芽胞杆菌抑菌物质的绝大部分；另一类主要包括聚酮类、氨基糖类以及脂肽类等的抗生素。迄今为止国内外多个实验室通过分离其发酵产物，得到了一些低分子量的抗菌物质，并进行了深入研究(Arguelles-Arias A et al.，Bacillus amyloliquefaciens GAl as a source ofpotent antibiotics and other secondary metabolites for biocontrol of plantpathogens，2009，Microb Cell Fact，8：63)。 

解淀粉芽胞杆菌通过成功定殖至植物根际、体表或体内，同病原菌竞争植物周围的营养、分泌抗菌物质抑制病原菌生长，同时诱导植物防御系统抵御病原菌入侵，从而达到生防目的。其主要防治对象大部分为丝状真菌所引起的植物病害，如水稻纹枯病、番茄叶霉病、大豆根腐病、苹果霉心病、棉花立枯病、棉花枯萎病等(程洪斌等，枯草芽胞杆菌防治植物真菌病害研究进展，上海农业学报，2006，22(1)： 109-112)。对于芸苔根肿菌具有抑制作用的解淀粉芽胞杆菌菌株的报道还比较少。此外，解淀粉芽胞杆菌能够产生耐热、耐干旱的芽胞，具有极强的抗逆能力，作为生防菌剂具有良好的应用前景。目前商品化的解淀粉芽胞杆菌制剂种类较少，如有获得有限商品化生产应用许可的解淀粉枯草芽胞杆菌变种(Bacillus subtilisvar.amyloliquefaciens)FZB24。 

白菜根肿病(clubroot)又称根瘤病，1978年由俄国学者Worolin发现其病原，并命名为芸苔根肿菌(plasmodiophora brassica)，属真菌之鞭毛菌亚门，根肿菌纲。此病为世界性病害，多发生于温带地区而造成极大的经济损失，至今仍是一大难题。根肿病主要发生在植株根部，促使根部形成肿瘤。肿瘤一般为纺缍形、平指形或不规则形，大的如鸡蛋或更大些，小的只有小米粒大小。主根上的肿瘤一般大而少，侧根上的则小而多。肿瘤初期表面光滑，后期常发生龟裂，变得十分粗糙，常因杂菌的浸染而腐烂，病株的地上部表现为生长缓慢，植株矮小如缺水症状。发病后期萎蔫低垂更甚，而且叶片黄，严重的可以引起植株死亡。根肿病病原菌可危害十字花科多种作物，其严重性因生理小种不同而异。病菌孢子囊在6-30℃均可发芽，但以18-25℃为最适宜，此适温也是发病的最适温度条件，当温度低于或高于此范围时不发病或发病轻，发病最适土温为21-22℃。土壤条件以pH值最具影响力，pH值4.0-7.0均可以发病，但以5.4-6.5为最适发病pH值，一般pH值7.0或7.2以上不发病，土中可交换性钙离子浓度达到1200mg/kg时也不发病(杨莲等，白菜根肿病田间发生消长规律研究，植保技术与推广，2003，23(7)：17-18)。 

发明内容

本发明的目的是针对上述现状，旨在提供一种解淀粉芽胞杆菌，解淀粉芽胞杆菌的培养方法及从其分离对芸苔根肿菌具有抑菌作用的活性物质的方法，活性物质的用途。 

本发明目的的实现方式为，一种解淀粉芽胞杆菌命名解淀粉芽胞杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)HB-26，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏日2011年7月18日，保藏中心编号CCTCC NO.M2011259。