[发明专利]核糖核酸酶的检测方法及其应用和试剂盒

权利要求书

1.一种核糖核酸酶的检测方法，该方法包括以下步骤：1)从受试者个体中获得体液样本；2)使所述体液样本与双链核酸接触，使得所述双链核酸能够被所述体液样本中可能存在的核糖核酸酶切割；3)检测步骤2)中的接触后的产物，从而检测所述体液样本中核糖核酸酶的含量；

其中，所述体液样本为血液、血浆、血清、唾液、组织液和尿液样本中的至少一种；

所述双链核酸为能够被核糖核酸酶切割的双链核酸，其长度为7-30个碱基对，所述双链核酸的第一单链的碱基序列中含有至少一个CA碱基序列或UA碱基序列，第二单链的碱基序列中含有与第一单链中CA碱基序列或UA碱基序列互补的UG碱基序列或UA碱基序列，所述双链核酸的一端连接有能量供体基团，另一端连接有能量受体基团，且所述能量供体基团和能量受体基团之间能够进行能量转移。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述双链核酸的长度为22、23、24、25、26、27、28、29或30个碱基对。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其中，所述双链核酸的长度为7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21个碱基对。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其中，所述双链核酸的长度为9、10、11、12、13、14或15个碱基对。

5.根据权利要求3所述的检测方法，其中，所述双链核酸的长度为7、8、9、10、11或12个碱基对。

6.根据权利要求1-5中任意一项所述的检测方法，其中，所述双链核酸的第一单链和第二单链完全互补，所述第一单链的碱基序列为5’-AUGAGCCUGAUUU、5’-AUGAGCCUAAUUU、5’-GGCUGCU、5’-GAAUGAGCU、5’-GAGUCAGCUAATCUU、5’-UGGUAUGAGCCUGAUUUUGAU或5’-AGCUGGUGGUACAGAUGAUCUUGCAUCGUC。

7.根据权利要求1-5中任意一项所述的检测方法，其中，所述双链核酸的第一单链和第二单链完全互补，所述第一单链的碱基序列为5’-AUGAGCCUGAUUU。

8.根据权利要求1-7中任意一项所述的检测方法，其中，所述双链核酸中含有至少一个脱氧核糖核苷酸基团。

9.根据权利要求1-8中任意一项所述的检测方法，其中，所述双链核酸中含有至少一个修饰的核苷酸基团。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其中，所述修饰的核苷酸基团为磷酸基团、核糖基团和碱基中的至少一种被修饰的核苷酸基团。

11.根据权利要求10所述的检测方法，其中，核糖基团被修饰的核苷酸基团为核糖基团的2’-羟基被甲氧基或氟取代的核苷酸基团。

12.根据权利要求1-11中任意一项所述的检测方法，其中，所述能量供体基团和所述能量受体基团位于同一条核酸单链上。

13.根据权利要求1-11中任意一项所述的检测方法，其中，所述能量供体基团和所述能量受体基团位于不同核酸单链上。

14.根据权利要求1-13中任意一项所述的检测方法，其中，所述能量供体基团为荧光供体基团，所述能量受体基团为荧光受体基团。

15.根据权利要求14所述的检测方法，其中，所述荧光供体基团为选自6-羧基荧光素基团、5-四氯荧光素基团、5-六氯荧光素基团、6-羧基-x-罗丹明基团、N，N′-对羧苄基吲哚三菁基团和6-羧基四甲基罗丹明基团中的至少一种。

16.根据权利要求14所述的检测方法，其中，所述荧光受体基团为选自4-(4’-二甲基对氨基偶氮苯)苯甲酸基团、N，N′-双甲基-N，N′-联苯-4-(5-叔丁氧羰基戊胺)-哌啶砜基罗丹明基团、4′，5′-二硝基荧光素基团、氨基哌啶酸基团、4-(4-硝化苯嗪基)苯胺基团和4-(4-硝化苯嗪基)萘胺基团中的至少一种。

17.权利要求1-16中任意一项所述的检测方法在肿瘤检测中的应用。

18.根据权利要求17所述的应用，其中，所述肿瘤为胃癌、结肠癌或肺癌。