[发明专利]一种快速制备糖肽的方法

说明书

技术领域

本发明属于食品领域，涉及蛋白改性以及制备糖肽的方法，特别涉及一种多肽糖基化接枝的方法。

背景技术

大部分天然蛋白质都带有共价键相连的多糖侧链，糖蛋白以各种形式广泛存在于动植物和某些微生物中，它在生物体中起着很关键的作用，诸如细胞信号识别、生长调控、细胞间的信息传达，及免疫调节等多种生理功能。因此，糖蛋白引起了人们的广泛关注。但分离纯化糖蛋白很困难，靠基因工程技术制备也很受限制，所以在生化，免疫细胞生物学及医学研究中必须通过化学合成糖蛋白的部分结构——糖肽来作为模型分子，以供活性和构效关系研究，糖肽合成也就应运而生。除此之外，糖肽具有明显的抗肿瘤、镇痛、免疫调节、抗缺氧、促进多种细胞因子、抗乙肝病毒的产生和改善某些老年性疾病症状等作用。由于肽链较短，糖肽比糖蛋白有更优越的乳化性质，乳化稳定性更好，可用作乳化剂、稳定剂等。另外，作为一种生理活性肽，糖肽引起了国内外研究者的广泛关注。

近几年生命科学家强烈建议把“大分子拥挤”环境与pH、离子强度和溶液组成等因素一样用于研究生物大分子，加入拥挤物质逐渐成为一种研究大分子的途径，从而加深对分子间相互作用的了解。采用“大分子拥挤环境”作为温和的反应体系，将生命科学领域的拥挤理论应用于糖基化接枝反应中，当体系中存在高浓度的生物大分子时，大分子之间的反应遵循分子排斥容积理论，反应向溶质总体积减小的方向移动，即朝结合方向移动。大分子拥挤环境能够使蛋白分子在水溶液中同样处于非聚集或者较少聚集的反应状态，同时，促进蛋白质与多糖的反应向着共价结合的方向进行，所得产物具有优越的功能性，有良好的工业应用前景。作为一种新的有效的方法，解决了传统方法的弊端(申请号：201010237456.1)。比如干热法，干热处理前原料水分含量应较低，需要干燥，而且在反应过程中需要保持恒定的温度和湿度，通常是在60℃反应1～3周，实验条件不容易控制，固相反应中反应物接触不均匀，反应不充分，产物通常带有浅黄或浅棕的颜色。

发明内容

本发明的目的是提供一种多肽糖基化接枝方法。本发明模拟生命科学领域的大分子拥挤体系，体系中的拥挤试剂可以是惰性高聚物或葡聚糖。该法具有操作方便、反应时间短、所得糖肽功能性优越等优点，克服了现有蛋白质糖基化接枝改性方法难以实现工业化的缺陷，产品在食品工业中具有规模化的应用前景。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种快速制备糖肽的方法，包括如下步骤：

(1)将蛋白酶解成多肽，反应结束后灭酶、离心、取上清液干燥；

(2)模拟生命科学领域的大分子拥挤体系，将拥挤试剂置于反应装置中，加入缓冲溶液，使之充分溶解；

(3)将多糖和步骤(1)得到的多肽加入步骤(2)的溶液中，充分搅拌2h后，加入0.02％w/w的NaN₃防腐，5℃静置过夜后，50-70℃搅拌1-8h，反应结束后迅速冷却至低于25℃，若拥挤试剂为聚蔗糖70、聚乙二醇2000，则还要除去拥挤试剂；

(4)最后离心、取上清液干燥，得到糖肽产品。

优选地，所述多肽与拥挤试剂的质量比为1∶1～1∶8，多肽与多糖的质量比为1∶0.5～1∶4。

优选地，步骤(1)所述蛋白为大豆分离蛋白、脱脂大豆粉、大豆浓缩蛋白、乳清蛋白、β-乳球蛋白或小麦面筋蛋白。

优选地，步骤(1)所述酶为酸性蛋白酶、复合蛋白酶或中性蛋白酶，所述酸性蛋白酶优选胃蛋白酶，酶解程度控制在水解度DH≤2.0。

优选地，所述酶解程度控制是将蛋白配制成质量分数为10％的溶液，加热至37～55℃，加入酶，酶解30min，其中，酶与蛋白的质量比为1∶100。

所述拥挤试剂为高分子惰性聚合物，优选聚蔗糖70、聚乙二醇2000或葡聚糖。

优选地，所述多糖为葡聚糖、半乳甘露聚糖、卡拉胶和可溶性淀粉中的一种或者一种以上。

优选地，所述反应装置为带恒温加热搅拌装置的密闭容器。

优选地，所述缓冲溶液是pH5.5～7.5的磷酸盐缓冲液。

上述方法制备的糖肽应用于营养品、抗氧化剂、乳化剂或稳定剂等食品添加剂行业。