[发明专利]一种通过同源重组敲除manX的高产氨基葡萄糖工程菌及其构建方法

权利要求书

1.一种氨基葡萄糖基因工程菌，是克隆E.coli BL21(DE3)基因组中氨基葡萄糖合成酶glmS基因和酿酒酵母S.cerevisiae S288C基因组中氨基葡萄糖乙酰化酶gna1基因，同时敲除乙酰氨基葡萄糖磷酸转运系统nagE基因和甘露糖磷酸转移系统manX基因构建而成的重组大肠杆菌。

2.根据权利要求1所述基因工程菌，其特征在于，所述氨基葡萄糖合成酶的基因来源于GenBankNo.CP001509.3基因组中glmS片断，氨基葡萄糖乙酰化酶gna1基因来源于GenBank NC_001138。

3.根据权利要求1所述基因工程菌，其特征在于，将氨基葡萄糖合成酶编码基因glmS和氨基葡萄糖乙酰化酶编码基因gna1连接到载体pET-28a(+)上。

4.根据权利要求1所述基因工程菌，其特征在于，大肠杆菌为E.coli ATCC 25947。

5.一种权利要求1所述基因工程菌的构建方法，具体步骤如下：

1)用限制性内切酶Sac I和Hind Ⅲ对glmS基因片断和pET-28a(+)进行酶切，并通过连接反应将glmS基因片断插入质粒pET-28a(+)的Sac I和Hind Ⅲ位点之间；

2)用限制性内切酶NotI和Xho I对gna1基因片断和pET-28a(+)进行酶切，并通过连接反应将gna1基因片断插入质粒pET-28a(+)的Not I和Xho I位点之间得到重组质粒pET-28a(+)-glmS-gna1；

3)敲除重组菌E.coli ATCC 25947基因组中nagE和manX基因片段，得到nagE和manX基因失活的菌株E.coli-ΔnagE-ΔmanX；

4)将质粒pET-28a(+)-glmS-gna1转化E.coli-ΔnagE-ΔmanX，得到基因工程菌E.coli-glms-gna1-ΔnagE-ΔmanX。