[发明专利]PRRSV的检测试剂和检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及兽医领域，具体涉及猪繁殖与呼吸病毒(Porcine Reproductive andRespiratory Syndrome Virus，PRRSV)的检测试剂和检测方法。具体地，本发明涉及PRRSV编码的Nsp2蛋白中的免疫原性片段及其用途，以及PRRSV中的Nsp2编码序列中的片段及其用途。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS)是一种感染率高、发病急、病死率高的接触性传染病。2006年我国大规模爆发该疾病，引起大量的妊娠母猪流产、死胎、木乃伊胎，育肥猪高热、厌食、死亡，给我国的养猪业造成了严重的经济损失。经过病毒分离和病毒基因组的序列比对发现，引起该高热病是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。

PRRSV是一种正链RNA病毒，目前已发现两种基因型：欧洲型和美洲型。PRRSV基因组中有多个开放阅读框，其中第一个开放阅读框(ORF1a和ORF1b)含有PRRSV基因组的80％的序列，其编码PRRSV病毒复制所必须的RNA复制酶(Straw et al，Diseases ofSwine，9^TH edition，chapter 24(2006))。ORF1a和ORF1b被翻译成一个多蛋白(poly-protein)，该多蛋白被其中含有的蛋白酶活性区域切割成多个非结构蛋白，包括Nsp1-Nsp12(见，例如，Vries et al，Seminars in Virology，8：33-47(1997)；Allende et al，Journal of General Virology，80：307-315(1999))。

Nsp2蛋白具有蛋白酶活性区域，在多蛋白的酶切处理中起重要的作用。已经发现，Nsp2蛋白对PRRSV的致病性至关重要，Nsp2中缺失某些序列后会导致PRRSV无法存活(Han et al.，Journal of Virology，81(18)：9878-9890(2007))，或者感染细胞的能力减弱(Kimet al，Virus Genes，38：118-128(2008))。本领域也已经开发出了具有Nsp2缺失的减毒PRRSV疫苗(中国专利申请CN101633909A)。

在病毒传播的情况下，如果能够及时识别出感染了致病性病毒的动物，并及早将这些被感染的动物从畜群中隔离，那么往往能够避免病毒的扩大传播，减少经济损失。但目前针对PRRSV的检测方法具有很多局限性，例如，需要病毒分离鉴定、使用活病毒存在散度危险、实验条件要求较高、操作繁锁以及难以区分天然感染的动物和经疫苗免疫的动物等。在兽医实际临床工作中，大量的血清样品监测及预防未知疾病的爆发迫切需要一种反应快速、操作简便、结果准确、生物安全性高的检测试剂和方法。

发明内容

在一方面，本发明提供了一种分离的多肽，其含有与SEQ ID NO：1具有至少95％同源性的多肽片段中的一个或多个免疫原性片段。在某些实施方式中，所述免疫原性片段包括至少6个、至少7个、至少8个、或至少9个连续的氨基酸。

在某些实施方式中，所述多肽能够在体内产生特异性结合所述免疫原性片段的抗体。在某些实施方式中，所述多肽能够检测样品中是否存在特异性结合所述免疫原性片段的抗体。

在某些实施方式中，所述多肽含有SEQ ID NO：1中的一个或多个免疫原性片段。在某些实施方式中，所述免疫原性片段选自：SVKITRPKYSAQAI(SEQ ID NO：2)、GHLQKEKEA(SEQ ID NO：3)和PRTPAPSVSAESDLT(SEQ ID NO：4)。

在某些实施方式中，所述多肽与载体物质相连。在某些实施方式中，所述载体是载体蛋白或聚合物。

在另一方面，本发明提供了一种检测试剂，其包含本发明提供的分离的多肽。在另一方面，本发明还提供了一种检测装置，其包括含有所述多肽的所述检测试剂，并且所述检测试剂附着在固相支持物上。

在另一方面，本发明还提供了一种检测样品中抗体的方法，所述样品来自被PRRSV感染的猪，该方法包括将所述样品与本发明提供的分离的多肽接触，并检测所述多肽与样品中抗体的特异性结合。