[发明专利]精氨酸糖苷的制备方法及在治疗糖尿病药物的应用

说明书

技术领域

本发明公开一种精氨酸糖苷的制备方法，还公开了AFG在治疗1型、2型糖尿病及其并发症药物的应用,属于中医药学技术领域。

背景技术

糖尿病是一种需长期治疗的慢性疾病。西医治疗糖尿病是口服降糖药物如格列本脲、二甲双胍、罗格列酮等药物，必要时给予胰岛素，主要通过降低血糖或调节代谢分泌紊乱达到治疗疾病的目的。但长期服用降糖药会产生严重的抗药性、过敏性休克、低血糖，并引起肝肾损伤等不良反应等。针对这种慢性消耗性疾病不仅要依靠药物治疗，更主要是要求改变不良的生活习惯，同时服用补充治疗剂。

本发明涉及的精氨酸糖苷（简称：AFG）化学名为：1-(精氨酸-N^α基)-1-去氧-4-O-(α-D-吡喃葡萄糖基)-D-果糖，AFG在天然动植物中的含量有限，且提纯颇具难度，在文献报道的AFG合成方法：精氨酸与麦芽糖质量比为1：2或1:4，反应时间1h，反应温度80℃，溶剂为冰醋酸。AFG制备过程中涉及的美拉德反应中，反应的速率与反应底物的结构有着很大的关系，就还原糖褐变速率而言：五碳糖＞六碳糖＞双糖就氨基化合物而言，胺类＞碱性氨基酸＞中性氨基酸。而AFG是由六碳糖和碱性氨基酸反应而得，要提高AFG产率的同时也产生了大量的副产物，而降低副产物的量的同时AFG的转化率也随之降低，所以有效的控制反应只发生在初级阶段产生大量的AFG，而不使其进一步进入高级反应阶段。其合成率大约有15%-28%左右，同时有大量副产物产生，给后期纯化工作带来很大困难。因此，制约了AFG在医药方面的实用推广。

经检索目前还未见AFG在治疗治疗1型糖尿病和2型糖尿病药物中的应用。

发明内容

本发明公开一种精氨酸糖苷的制备方法，为一种新的合成方法，具有合成率高，分离纯化成本低等特点，使该化合物具有药用价值，适于工业化生产。

本发明还公开了精氨酸糖苷及其组合物在制备治疗1型糖尿病和2型糖尿病药物中的新用途。

本发明精氨酸糖苷的制备方法，包括以下步骤：

1）将精氨酸与麦芽糖以1:（2-6）的重量比例置入2-8倍量的冰醋酸中，加入美拉德反应抑制剂，精氨酸与抑制剂质量比为1：（0.1-3），在50-100℃条件下，反应10分钟到2小时得总反应物；

2）将总合成物低温真空浓缩至浸膏，硅胶干法拌样，挥去醋酸，过200~300目硅胶湿柱，50-90%乙醇洗脱，收集各流份，薄层色谱检查，收集Rf值为0.2的洗脱液部分，低压浓缩，冷冻干燥成粉末，溶于1-8倍量的0.2%醋酸水溶液中，过聚丙烯酰胺柱以0.2%醋酸水溶液洗脱，收集各流份，薄层色谱检查，收集Rf值为0.2的洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥即得。

所述的美拉德反应抑制剂选自：亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、保险粉中的任意一种。

本发明中的药物，其中含AFG纯品5%-55%，还含有氨基酸、微量元素、美拉德反应终产物等。本领域技术人员可以理解到，这些物质的存在会维持或者增强本发明的药物的作用。

以下实验表明本发明提供的AFG在治疗1型和2型糖尿病的临床用途：

试验例1

AFG对四氧嘧啶(ALX)所致糖尿病小鼠的作用（1型）

1实验材料与方法

1.1材料与试剂

精氨酸衍生物： AFG自制，纯度98%。

昆明小鼠，SPF级别雌鼠，(20 ± 2)g，吉林大学动物实验中心提供。

血糖仪：OneTouch?UltraEasy  美国强生公司，9 5 % 乙醇、氨水、盐酸、氢氧化钠、葡萄糖、无水磷酸氢二钠、无水硫酸钠、钼酸铵、砷酸氢二钠，均为分析纯试剂，北京化工厂。生理盐水，长春豪邦药业有限公司。PH4.6磷酸缓冲液（溶解四氧嘧啶用）四氧嘧啶(Alloxan)：美国Sigma公司出品。

1.2 方法

四氧嘧啶糖尿病小鼠的建模与分组：60只雌性昆明种小鼠适应性喂养1周后，随机分为2组，第1组8只为正常对照组(N)，第2组50只为造模组。模型制备时小鼠禁食不禁水12 h，腹腔注射四氧嘧啶，以生理盐水配成2% 溶液（现配现用），200 mg/kg注射后自由进食，72 h后尾静脉取血，测定血糖值(mmol/L)，取血糖值＞10 mmol/L为建模成功。将建模小鼠随机分为每组8只的糖尿病模型组（M），AFG高剂量组（AFGH），中剂量组（AFGM），低剂量组（AFGL）。AFG高、中、低剂量组灌胃10、30、50 mg/kg·d。