[发明专利]一种可检测不同株系马铃薯病毒的专用引物及其设计方法

权利要求书

1.一种可检测不同株系马铃薯病毒的专用引物，其特征是：包括如下引物中的至少一对：

引物对I：序列表的序列1和序列2所示核苷酸序列组成的引物对；

引物对II：序列表的序列3和序列4所示核苷酸序列组成的引物对；

引物对III：序列表的序列5和序列6所示核苷酸序列组成的引物对；

引物对IV：序列表的序列7和序列8所示核苷酸序列组成的引物对；

引物对V：序列表的序列9和序列10所示核苷酸序列组成的引物对；

引物对VI：序列表的序列11和序列12所示核苷酸序列组成的引物对；

所述检测马铃薯病毒是马铃薯Y病毒、马铃薯S病毒、马铃薯A病毒、马铃薯卷叶病毒、马铃薯M病毒或番茄斑萎病毒。

2.根据权利要求1所述的可检测不同株系马铃薯病毒的专用引物，其特征是：所述专用引物由引物对I、引物对II、引物对III、引物对IV、引物对V和引物对VI组成。

3.根据权利要求1所述的可检测不同株系马铃薯病毒的专用引物，其特征是：所述专用引物由引物对I、引物对II、引物对III、引物对IV、引物对V或引物对VI组成。

4.根据权利要求1至3任一项所述的可检测不同株系马铃薯病毒专用引物的检测方法，其特征是包括以下步骤：

A、病毒总RNA的提取：提取马铃薯病毒的总RNA；

B、RT-PCR：应用专用引物对病毒总RNA进行逆转录准备cDNA模板，应用专用引物对cDNA模板进行PCR反应，得扩增产物；

C、对扩增产物进行进行琼脂糖凝胶电泳检测，根据扩增片段大小判断病毒种类。

5.根据权利要求4所述的可检测不同株系马铃薯病毒专用引物的检测方法，其特征是：所述PCR的反应参数是94℃3min，94℃变性30s，59℃退火30s，72℃延伸30s，30个循环，最后72℃延伸10min，PCR反应结束后，取出扩增产物进行进行琼脂糖凝胶电泳检测。

6.一种权利要求1所述的可检测不同株系马铃薯病毒专用引物的设计方法，其特征是：包括以下方法或步骤，

a.通过NCBI的GENBANK数据库检索所有已报道、已发现、已提交数据库的上述任一病毒序列；

b.将同一病毒序列下载后，使用DNAMAN软件进行比对分析，筛选出不同株系的同一病毒的病毒序列；

c.通过DNAMAN软件将不同株系的同一病毒序列进行比对，寻找其保守区域；

d.使用PRIMER5，OLIGO引物设计软件在保守区域内设计引物；

e.将设计好后的备选引物提交到NCBI的BLAST系统中进行电子PCR筛选，选择相似性为100％，能搜索出最多不同株系同一病毒病毒序列的引物作为标准引物。