[发明专利]黄瓜果实长度相关基因的分子标记鉴定方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种黄瓜果实长度相关基因的分子标记鉴定方法，属于植物生物技术领域。

背景技术：

黄瓜品质性状的改善是育种研究的重要目标，而果长是黄瓜的重要品质性状之一，直接影响经济效益。随着商品经济的快速发展和人们生活条件的改善，黄瓜的消费形式日趋多样化，如鲜食、凉拌、炒食、汤食、泡菜、盐渍、糖渍、制干、制罐等。人们对不同用途的黄瓜长短要求不同，如酸渍加工需要短果型品种，而盐渍切片加工则需要长果型品种；具有整齐长度的黄瓜果实可以满足机械化采摘和工业流水线产品加工的要求。因此，黄瓜果长相关研究在满足人们消费需求方面具有重要的意义。

黄瓜果实属于瓠果，由子房和花托一并发育而成，果皮其实是花托的外表，可食部分为果皮和胎座。黄瓜具有单性结实能力，能力强弱因品种而异，而授粉能提高坐果率并促进果实发育。黄瓜果实生长曲线呈S型，谢花后生长缓慢，以后逐渐加速，生长到一定程度后又逐渐减慢，一般开花后10～15天达到商品成熟。日生长量夜间较大，白天较小。夜间生长以傍晚较快，黎明较慢。黄瓜果实的生长曲线符合Y＝a+bX+cX²+dX³数学模型，第一拐点处为果实生长速率较快时期，是黄瓜产量与品质形成的关键时期，但相对生长速率最快时期因品种而异(见参考文献，潘丹丹.黄瓜果实发育的细胞学研究.东北农业大学硕士学位论文，2009)。以往对黄瓜果实长度的研究，多集中在细胞学、内源激素与果实长度的关系、环境因素(温度、光照、水分、CO₂、矿质营养)对黄瓜果实发育的影响等方面，而对黄瓜果实长度进行遗传分析和分子标记相关研究的报道较少。因此寻找与黄瓜果实长度相关基因紧密连锁的分子标记，对于加快黄瓜育种进程具有重要的实际应用价值。

发明内容：

本发明的目的是针对上述存在的问题提供一种黄瓜果实长度相关基因的分子标记鉴定方法，能够更好地利用上述黄瓜果实长度相关基因分子标记，并将黄瓜果实长度相关基因分子标记应用于黄瓜育种的辅助选择。

上述的目的通过以下的技术方案实现：

黄瓜果实长度相关基因的分子标记鉴定方法，该方法包括如下步骤：

以果实长度未知的黄瓜品种或品系的DNA为模板，以CSWCT28为引物进行PCR扩增，对扩增产物进行3％琼脂糖凝胶电泳检测或者对扩增产物进行7.5％的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，如果扩增得到的带型与已知的短果实长度的黄瓜东农803带型一致，则该果实长度未知的黄瓜品种或品系为短果实长度的品种或品系，所述PCR扩增的程序为：94℃预变性5min，94℃变性30s，47℃退火1min，35个循环，72℃延伸1min，72℃延伸10min，最后4℃保存，所述的CSWCT28为：

引物1：5’-GAATTCAAAAGCATTTCAAAACTA-3’，

引物2：5’-GAATTCAATTGGGTTTTTGAACCC-3’。

所述的黄瓜果实长度相关基因的分子标记鉴定方法，所述PCR扩增中，每20μl的PCR反应体系如下：10×buffer：2μl，2mM dNTP：2μl，10pmol/μl的Primer 1：0.8μl，10pmol/μl的Primer 2：0.8μl，25mM MgCl₂：2.5μl，5U/μl的TaqDNA聚合酶：0.2μl，60ng/μl的模板DNA：1μl，ddH20：10.7μl。

黄瓜果实长度相关基因的分子标记鉴定方法在辅助选择黄瓜育种材料中的应用。

有益效果：

1.本发明直接以DNA的形式表现，在生物体的各个组织、各个发育阶段均可检测到，不受季节、环境限制，不存在表达与否等问题，因此，本发明在苗期就能够通过分子标记对黄瓜品种和品系的果实长度进行鉴定和筛选，减少人力和物力的浪费，提高育种效率。同时，DNA分子标记技术操作简单，成本低廉，用时短，在一天内即可完成全部的检测过程。

2.所需样本数量少，操作比较简便，效率高，成本低廉。

3.本发明易于掌握，不受环境条件影响，重复性高。

附图说明：

图1黄瓜果实长度相关基因分子标记检测结果(东农804)。M：DL2000DNAMarker；1：对照东农803；2～8：东农804单株。

具体实施方式：